24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2932  |  回复: 25
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 落明逐暗 at 2011-06-30 14:54:53:
请教楼主蛋白胶是用什么摄像系统拍的?染色剂和脱色剂是什么?胶跑得相当漂亮!

我是用分析双向电泳的扫描仪拍的,染色跟脱色跟普通考染一样
11楼2011-06-30 18:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-30 18:58:57:
这样呀,那OK啊,祝楼主好运,实验顺利!

用诱导前的上清当阴性对照,诱导后上清不分离直接做酶活性可以?
12楼2011-06-30 19:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

“上清不分离做酶活”——这个难说啊,毕竟上清那么多杂蛋白,谁知道会不会干扰呢
13楼2011-06-30 19:16:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-30 19:16:23:
“上清不分离做酶活”——这个难说啊,毕竟上清那么多杂蛋白,谁知道会不会干扰呢

哎,而且还是个蛋白酶,只检测其蛋白酶活性,悲催啊
14楼2011-06-30 20:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hooroberts at 2011-06-30 20:17:33:
哎,而且还是个蛋白酶,只检测其蛋白酶活性,悲催啊

原来是蛋白酶啊,那要纯化了才能测啊。
而且是蛋白酶的话,就更不要指望表达量能高了,这类蛋白对细胞都是有毒性的,表达量不可能大。
15楼2011-06-30 20:53:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hooroberts at 2011-06-30 20:17:33:
哎,而且还是个蛋白酶,只检测其蛋白酶活性,悲催啊

原来是蛋白酶啊,那要纯化了才能测啊。
而且是蛋白酶的话,就更不要指望表达量能高了,这类蛋白对细胞都是有毒性的,表达量不可能大。
16楼2011-06-30 20:59:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

还是疏水性膜蛋白,是不是不要指望了啊,我构建了4个表达载体,只有一个诱导出来了
17楼2011-06-30 21:04:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-30 20:59:07:
原来是蛋白酶啊,那要纯化了才能测啊。
而且是蛋白酶的话,就更不要指望表达量能高了,这类蛋白对细胞都是有毒性的,表达量不可能大。

还是疏水性膜蛋白,是不是不要指望了啊,我构建了4个表达载体,只有一个诱导出来了
18楼2011-06-30 22:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toxicpeach

木虫 (正式写手)

楼主确定你的目标条带就是表达的蛋白么?之前我们遇到过表达膜蛋白,诱导前后或者诱导与未诱导的相比较都有特异性的目标条带大小的蛋白出现,但是用标签的抗体(His单抗)做Western Blot杂交,居然没有做出来,那个条带不是我们需要的带标签的目标蛋白,是一个诱导后出现的细菌应激反应的蛋白。我还比较过我一次没有表达目标蛋白的细菌裂解物,诱导前后不同的蛋白条带非常多,可能有4-5条,只不过恰好都不在我要的大小,才避免了。建议楼主先做个Western Blot,用GST的抗体杂交一下,以免像我们一样走弯路。毕竟我以前做GST纯化的时候还是非常好做的。
海纳百川有容乃大,壁立千尺无欲则刚
19楼2011-06-30 23:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by toxicpeach at 2011-06-30 23:57:31:
楼主确定你的目标条带就是表达的蛋白么?之前我们遇到过表达膜蛋白,诱导前后或者诱导与未诱导的相比较都有特异性的目标条带大小的蛋白出现,但是用标签的抗体(His单抗)做Western Blot杂交,居然没有做出来,那个 ...

其实我也考虑过的,可是与目的融合蛋白大小相等,而且包涵体中还是挺多的,我只是没有放在这而已,这么大的应激蛋白应该少,western blot的话我也做过一次,用的是目的蛋白抗体,显色时好多带,后面也没有时间做了。不了了之
20楼2011-07-01 00:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hooroberts 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 9/450 2026-04-05 22:24 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +11 熊二想上岸 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:21 by 醉翁wl
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 0703调剂 +11 拾玖壹 2026-04-04 12/600 2026-04-05 10:29 by 果冻大王
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 282电子信息0854专硕调剂 +4 202451007219 2026-04-02 6/300 2026-04-04 21:55 by laoshidan
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 281求调剂 +10 aaawhy 2026-04-03 10/500 2026-04-03 21:42 by lbsjt
[考研] 282求调剂 不挑专业 求收留 +7 Yam. 2026-03-30 8/400 2026-04-03 14:12 by zhangdingwa
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 初试成绩337找调剂 +3 ??? ?. ? 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:43 by 土木硕士招生
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:19 by 蓝云思雨
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分,求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
信息提示
请填处理意见