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hooroberts

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签,蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白,在上清中纯化有希望吗,gst标签的,整了几次没出来,放好久了,如果不行的话是不是纯化包涵体也行,gst的是不是变性后腰先复性再纯化,如果复性的话怎么复性?做酶活的,对量不要求多大。
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hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by toxicpeach at 2011-06-30 23:57:31:
楼主确定你的目标条带就是表达的蛋白么?之前我们遇到过表达膜蛋白,诱导前后或者诱导与未诱导的相比较都有特异性的目标条带大小的蛋白出现,但是用标签的抗体(His单抗)做Western Blot杂交,居然没有做出来,那个 ...

其实我也考虑过的,可是与目的融合蛋白大小相等,而且包涵体中还是挺多的,我只是没有放在这而已,这么大的应激蛋白应该少,western blot的话我也做过一次,用的是目的蛋白抗体,显色时好多带,后面也没有时间做了。不了了之
20楼2011-07-01 00:04:31
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693137546

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

建议楼主不要做包涵体呀
大风气息云飞扬
2楼2011-06-27 23:08:46
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hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 693137546 at 2011-06-27 23:08:46:
建议楼主不要做包涵体呀

不到必要时我也不想
3楼2011-06-28 21:48:29
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

【答案】应助回帖

hooroberts(金币+2): 试过,16度,0.15mmol,24小时,没效果。 2011-06-29 23:51:13
建议楼主降低发酵温度和转速,延长发酵时间,这样应该会提高在上清中的表达量。30℃,200rpm,6-7小时应该不错。之后再进行纯化就能有合适的上样量。不然上样量太低也没有好的纯化效果。光凭图的话,真的量太少了。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
4楼2011-06-29 10:05:54
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