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hooroberts

新虫 (小有名气)

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[求助] gst标签，蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白，在上清中纯化有希望吗，gst标签的，整了几次没出来，放好久了

，如果不行的话是不是纯化包涵体也行，gst的是不是变性后腰先复性再纯化，如果复性的话怎么复性？做酶活的，对量不要求多大。

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1楼2011-06-27 22:55:24

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toxicpeach

木虫 (正式写手)

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楼主确定你的目标条带就是表达的蛋白么？之前我们遇到过表达膜蛋白，诱导前后或者诱导与未诱导的相比较都有特异性的目标条带大小的蛋白出现，但是用标签的抗体(His单抗)做Western Blot杂交，居然没有做出来，那个条带不是我们需要的带标签的目标蛋白，是一个诱导后出现的细菌应激反应的蛋白。我还比较过我一次没有表达目标蛋白的细菌裂解物，诱导前后不同的蛋白条带非常多，可能有4-5条，只不过恰好都不在我要的大小，才避免了。建议楼主先做个Western Blot，用GST的抗体杂交一下，以免像我们一样走弯路。毕竟我以前做GST纯化的时候还是非常好做的。