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hooroberts

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签,蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白,在上清中纯化有希望吗,gst标签的,整了几次没出来,放好久了,如果不行的话是不是纯化包涵体也行,gst的是不是变性后腰先复性再纯化,如果复性的话怎么复性?做酶活的,对量不要求多大。
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toxicpeach

木虫 (正式写手)

超声破碎之前就用NP-40增溶的话,相当于把可溶的和膜的那部分都混在一起了,纯化的时候更麻烦一点,相当于要从更多的蛋白中纯化出目标蛋白,对于柱子来说,载量是一定的,不是最好的选择,可以尝试我说的那种方法。
A general protocol for the crystallization of membrane proteins for X-ray structural investigation
NATURE PROTOCOLS | VOL.4 NO.5 | 2009 |619
你可以看一下
海纳百川有容乃大,壁立千尺无欲则刚
23楼2011-07-01 22:38:25
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查看全部 26 个回答

693137546

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

建议楼主不要做包涵体呀
大风气息云飞扬
2楼2011-06-27 23:08:46
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hooroberts

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 693137546 at 2011-06-27 23:08:46:
建议楼主不要做包涵体呀

不到必要时我也不想
3楼2011-06-28 21:48:29
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

【答案】应助回帖

hooroberts(金币+2): 试过,16度,0.15mmol,24小时,没效果。 2011-06-29 23:51:13
建议楼主降低发酵温度和转速,延长发酵时间,这样应该会提高在上清中的表达量。30℃,200rpm,6-7小时应该不错。之后再进行纯化就能有合适的上样量。不然上样量太低也没有好的纯化效果。光凭图的话,真的量太少了。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
4楼2011-06-29 10:05:54
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