24小时热门版块排行榜    

查看: 3242  |  回复: 14
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

sanmiao

木虫 (正式写手)


[交流] 氨氧化细菌PCR问题

氨氧化细菌PCR什么条件啊,我pCR时50度,55度,60度都试过,但是都没有P出过来啊!

我做的是土壤DNA,DNA是试剂盒提取的,做氨氧化古菌的时候条带非常亮!!!但是就是氨氧化细菌做不出来啊!

不知道其他人有没有做这个的啊,给点建议,谢谢啊!!!

[ Last edited by sanmiao on 2011-6-26 at 14:54 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★ ★ ★
sanmiao(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+4, EPI+1): 2011-06-25 16:49:35
PCR这个跟你的菌没有什么关系,关键是看你的引物的退火温度如何,两个引物的TM值之和减去5,然后再上下各做几个温度梯度看看哪一个温度下P出来的条带最亮以后就选择那个退火温度了;
其实PCR的效果跟跟多因素有关系:模板 引物 退火温度 延伸时间 体系等等。。。。

不过祝你好运!
2楼2011-06-25 15:40:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuj2007

木虫 (正式写手)



sanmiao(金币+1):谢谢参与
一多看一下 外文文献,二看一些你PCR的引物是自己设计的还是文献中的,质量怎么样。 不行自己重新设计。
4楼2011-06-25 16:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmiao(金币+1):谢谢参与
你的菌是怎么处理的?直接菌落PCR?详细说下吧。
样品没处理好,DNA没释放出来,或者被降解掉,这也是可能的原因。
5楼2011-06-25 18:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinger_qd

木虫 (正式写手)



sanmiao(金币+1):谢谢参与
要把你的实验条件讲得详细一些,才能得到有用处的帮助啊。这样写大家也只能是泛泛而谈,没有针对性的。
6楼2011-06-26 14:45:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bear0329

金虫 (正式写手)



sanmiao(金币+1):谢谢参与
具体操作步骤如何?PCR本身很敏感,一些细小的环节没做好都可能扩不出,祝你好运
7楼2011-06-26 16:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翰章

新虫 (小有名气)



sanmiao(金币+1):谢谢参与
(Rotthauwe et al. 1997)这篇文章里的条件应该是可以的,我做的也是土壤,P出来的效果很好
8楼2011-07-15 14:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xw111202105

铁虫 (初入文坛)



sanmiao(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么引物啊   我和你的情况正好相反啊   我古菌p不出来    细菌效果很好呢   古菌你用的啥引物    急
9楼2013-01-23 15:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xw111202105

铁虫 (初入文坛)


还在做古菌吗   条件能告诉我吗
10楼2013-01-23 15:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmiao

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2475042楼: Originally posted by xw111202105 at 2013-01-23 15:09:17
还在做古菌吗   条件能告诉我吗

现在不做了,我以前做的时候是,引物基本上都是一样的引物,就是文献中常用的,因为环境样品中的AOA比AOB多很多,所以好P,退火55度!!!
11楼2013-01-23 15:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋之静美

新虫 (初入文坛)



sanmiao(金币+1): 谢谢参与
求PCR条件
12楼2014-07-30 10:37:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅溪

铁虫 (小有名气)



sanmiao(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
9楼: Originally posted by xw111202105 at 2013-01-23 15:07:32
你用的是什么引物啊   我和你的情况正好相反啊   我古菌p不出来    细菌效果很好呢   古菌你用的啥引物    急

古菌我也P出来了,不过细菌没有?请教下氨氧化细菌的引物及程序?
13楼2014-11-25 19:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

837502131

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by xw111202105 at 2013-01-23 15:07:32
你用的是什么引物啊   我和你的情况正好相反啊   我古菌p不出来    细菌效果很好呢   古菌你用的啥引物    急

请问你氨氧化细菌pcr的具体体系和程序是什么呢?最好是带GC夹的,我的细菌p不出来,古菌好好的
14楼2014-11-25 19:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

岁月静好!

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 翰章 at 2011-07-15 14:59:47
(Rotthauwe et al. 1997)这篇文章里的条件应该是可以的,我做的也是土壤,P出来的效果很好

你把这篇文献给我吗?我还想要一下AOB的PCR条件
15楼2015-06-01 17:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
6931375463楼
2011-06-25 16:02   回复  
sanmiao(金币+1):谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 sanmiao 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 281求调剂(0805) +9 烟汐忆海 2026-03-16 19/950 2026-03-19 11:42 by laoshidan
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭! 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见