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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 氨氧化细菌PCR问题
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sanmiao

木虫 (正式写手)

[交流] 氨氧化细菌PCR问题

氨氧化细菌PCR什么条件啊，我pCR时50度，55度，60度都试过，但是都没有P出过来啊！

我做的是土壤DNA，DNA是试剂盒提取的，做氨氧化古菌的时候条带非常亮！！！但是就是氨氧化细菌做不出来啊！

不知道其他人有没有做这个的啊，给点建议，谢谢啊！！！

[ Last edited by sanmiao on 2011-6-26 at 14:54 ]
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1楼 2011-06-25 15:32:42
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sanmiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2475042楼: Originally posted by xw111202105 at 2013-01-23 15:09:17
还在做古菌吗   条件能告诉我吗

现在不做了，我以前做的时候是，引物基本上都是一样的引物，就是文献中常用的，因为环境样品中的AOA比AOB多很多，所以好P，退火55度！！！
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11楼2013-01-23 15:18:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
sanmiao(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+4, EPI+1): 2011-06-25 16:49:35
PCR这个跟你的菌没有什么关系，关键是看你的引物的退火温度如何，两个引物的TM值之和减去5，然后再上下各做几个温度梯度看看哪一个温度下P出来的条带最亮以后就选择那个退火温度了；
其实PCR的效果跟跟多因素有关系：模板 引物 退火温度 延伸时间 体系等等。。。。

不过祝你好运！
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2楼2011-06-25 15:40:30
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xuj2007

木虫 (正式写手)
★
sanmiao(金币+1):谢谢参与
一多看一下 外文文献，二看一些你PCR的引物是自己设计的还是文献中的，质量怎么样。 不行自己重新设计。
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4楼2011-06-25 16:18:58
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
sanmiao(金币+1):谢谢参与
你的菌是怎么处理的？直接菌落PCR？详细说下吧。
样品没处理好，DNA没释放出来，或者被降解掉，这也是可能的原因。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-25 18:10:58
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