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sanmiao

木虫 (正式写手)


[交流] 氨氧化细菌PCR问题

氨氧化细菌PCR什么条件啊,我pCR时50度,55度,60度都试过,但是都没有P出过来啊!

我做的是土壤DNA,DNA是试剂盒提取的,做氨氧化古菌的时候条带非常亮!!!但是就是氨氧化细菌做不出来啊!

不知道其他人有没有做这个的啊,给点建议,谢谢啊!!!

[ Last edited by sanmiao on 2011-6-26 at 14:54 ]
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sanmiao

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2475042楼: Originally posted by xw111202105 at 2013-01-23 15:09:17
还在做古菌吗   条件能告诉我吗

现在不做了,我以前做的时候是,引物基本上都是一样的引物,就是文献中常用的,因为环境样品中的AOA比AOB多很多,所以好P,退火55度!!!
11楼2013-01-23 15:18:45
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查看全部 15 个回答
★ ★ ★ ★ ★
sanmiao(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+4, EPI+1): 2011-06-25 16:49:35
PCR这个跟你的菌没有什么关系,关键是看你的引物的退火温度如何,两个引物的TM值之和减去5,然后再上下各做几个温度梯度看看哪一个温度下P出来的条带最亮以后就选择那个退火温度了;
其实PCR的效果跟跟多因素有关系:模板 引物 退火温度 延伸时间 体系等等。。。。

不过祝你好运!
2楼2011-06-25 15:40:30
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xuj2007

木虫 (正式写手)



sanmiao(金币+1):谢谢参与
一多看一下 外文文献,二看一些你PCR的引物是自己设计的还是文献中的,质量怎么样。 不行自己重新设计。
4楼2011-06-25 16:18:58
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sanmiao(金币+1):谢谢参与
你的菌是怎么处理的?直接菌落PCR?详细说下吧。
样品没处理好,DNA没释放出来,或者被降解掉,这也是可能的原因。
5楼2011-06-25 18:10:58
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