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20100136

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白切胶回收 做质谱

本人有一PEG修饰蛋白，修饰后分子量在90kD左右，想通过MALDI-TOF测定分子量。问题是蛋白纯度不高，想通过PAGE胶回收的方法获得高纯度的蛋白。搜索了论坛有关蛋白胶回收的帖子，收益匪浅，但仍有问题请教大家：

1. 关于电泳 变性还是非变性：我的用途是测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗？SDS会污染样品导致分子量测定结果吗？最保险的方法是native-PAGE？

2.关于电泳后的蛋白洗脱：论坛上给出了两种方法，一是将胶切碎或研碎，置于溶液中，冰箱过夜，离心得上清再透析浓缩；二是电洗脱，置于透析袋中水平电泳。第一种方法比较简单，但是我担心研碎的过程会不会导致胶成分小部分溶解，从而导致上清中成分复杂，影响质谱测定？在这点上说是不是电洗脱方法会好一点呢？

请虫友们帮忙分析分析，先行谢过啦！
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1楼 2011-06-22 18:13:34
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20100136

铜虫 (初入文坛)
大家帮帮忙啊！谢谢哦！
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2楼2011-06-23 10:08:59
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renruntan

禁虫 (著名写手)
★
20100136(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2011-06-23 11:23:25
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20100136

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by renruntan at 2011-06-23 11:23:25:
同求啊！

楼上的虫友也做这方面工作吗？
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4楼2011-06-23 12:20:04
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renruntan

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-06-23 12:31:54
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susanbao

铁虫 (初入文坛)
★
20100136(金币+1):谢谢参与
其实蛋白做MALDI-TOF，SDS-PAGE电泳可以的，不必纯化，直接给胶就可以了，保证3ug量就够了
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6楼2011-06-23 14:49:01
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20100136

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by susanbao at 2011-06-23 14:49:01:
其实蛋白做MALDI-TOF，SDS-PAGE电泳可以的，不必纯化，直接给胶就可以了，保证3ug量就够了

请问楼上的虫友，你的MALDI-TOF是在哪里做的？90kd的蛋白是不是不容易做啊？
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7楼2011-06-23 16:29:59
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yaiqi-87

铜虫 (小有名气)
★
20100136(金币+1): 谢谢参与
你好，本人最近在用20KD PEG修饰24KD左右的蛋白，但在跑15% SDS-PAGE电泳后，染色发现经修饰的蛋白拖尾现象很严重，请问你遇到过这种现象吗？该如何解决呢？谢谢！
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8楼2013-08-10 09:56:51
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jinyanyan

铜虫 (小有名气)
★
20100136(金币+1): 谢谢参与
SDS-page的分子量可能和理论分子量有些差异，我的蛋白的size就偏大，打质谱的时候直接从胶上切下目的条带送去就行
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9楼2013-08-18 10:08:04
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