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20100136

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 蛋白切胶回收做质谱

本人有一PEG修饰蛋白，修饰后分子量在90kD左右，想通过MALDI-TOF测定分子量。问题是蛋白纯度不高，想通过PAGE胶回收的方法获得高纯度的蛋白。搜索了论坛有关蛋白胶回收的帖子，收益匪浅，但仍有问题请教大家：

1. 关于电泳变性还是非变性：我的用途是测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗？SDS会污染样品导致分子量测定结果吗？最保险的方法是native-PAGE？

2.关于电泳后的蛋白洗脱：论坛上给出了两种方法，一是将胶切碎或研碎，置于溶液中，冰箱过夜，离心得上清再透析浓缩；二是电洗脱，置于透析袋中水平电泳。第一种方法比较简单，但是我担心研碎的过程会不会导致胶成分小部分溶解，从而导致上清中成分复杂，影响质谱测定？在这点上说是不是电洗脱方法会好一点呢？

请虫友们帮忙分析分析，先行谢过啦！

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1楼 2011-06-22 18:13:34

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susanbao

铁虫 (初入文坛)

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★
20100136(金币+1):谢谢参与

其实蛋白做MALDI-TOF，SDS-PAGE电泳可以的，不必纯化，直接给胶就可以了，保证3ug量就够了

赞一下(2人)

6楼2011-06-23 14:49:01

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20100136

铜虫 (初入文坛)

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大家帮帮忙啊！谢谢哦！

2楼2011-06-23 10:08:59

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20100136

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 516497

引用回帖:

Originally posted by renruntan at 2011-06-23 11:23:25:
同求啊！

楼上的虫友也做这方面工作吗？

4楼2011-06-23 12:20:04

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renruntan

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2011-06-23 12:31:54

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