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蛋白切胶回收 做质谱
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本人有一PEG修饰蛋白，修饰后分子量在90kD左右，想通过MALDI-TOF测定分子量。问题是蛋白纯度不高，想通过PAGE胶回收的方法获得高纯度的蛋白。搜索了论坛有关蛋白胶回收的帖子，收益匪浅，但仍有问题请教大家： 1. 关于电泳 变性还是非变性：我的用途是测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗？SDS会污染样品导致分子量测定结果吗？最保险的方法是native-PAGE？ 2.关于电泳后的蛋白洗脱：论坛上给出了两种方法，一是将胶切碎或研碎，置于溶液中，冰箱过夜，离心得上清再透析浓缩；二是电洗脱，置于透析袋中水平电泳。第一种方法比较简单，但是我担心研碎的过程会不会导致胶成分小部分溶解，从而导致上清中成分复杂，影响质谱测定？在这点上说是不是电洗脱方法会好一点呢？ 请虫友们帮忙分析分析，先行谢过啦！ |
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