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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 样品检测 峰与其他杂质峰分得不是很开？ 这是怎么回事？？
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[求助] 样品检测 峰与其他杂质峰分得不是很开？ 这是怎么回事？？

NADH的色谱检测
我正在做胞内NAD、NADH的检测，目前用HPLC检测，我用的流动相是
（乙腈：含有10mM四丁基溴化铵的300mM 磷酸钠缓冲液ph7.0=4:96），色谱柱：C18反相柱。
NADH标准品用的是NADH二钠盐（买不到NADH），
检测样品中的NAD的峰比较明显，但NADH的峰十分微弱，请问各位高手：

第一，是否NADH二钠盐与NADH出峰时间不一致，还是流动相不适合导致NADH出峰不明显？

第二，NAD的峰与其他杂质峰分得不是很开，而NADH的分离度较好。样品的ph值约为6.5。

所以请问：有什么办法可以使峰的分离度更好些？

谢谢！
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1楼 2011-06-20 14:38:54
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
★
novus(金币+1): 可以尝试调整流动相pH值呢？ 2011-06-22 22:45:28
引用回帖:
Originally posted by 中药2000 at 2011-06-20 16:18:58:
供试品也可考虑纯化一下。

谢谢！ 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了，再高不太好吧，磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低，因为能检测到另一种物质NAD。
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4楼2011-06-21 12:02:11
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

呵呵，分的不开是很常见的，需要优化流动相。
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2楼2011-06-20 16:18:26
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

laoyisng1122(金币+1): 非常感谢！ 2011-06-21 12:01:11
供试品也可考虑纯化一下。
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3楼2011-06-20 16:18:58
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