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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[求助] 样品检测 峰与其他杂质峰分得不是很开? 这是怎么回事??

NADH的色谱检测
我正在做胞内NAD、NADH的检测,目前用HPLC检测,我用的流动相是
(乙腈:含有10mM四丁基溴化铵的300mM 磷酸钠缓冲液ph7.0=4:96),色谱柱:C18反相柱。
NADH标准品用的是NADH二钠盐(买不到NADH),
检测样品中的NAD的峰比较明显,但NADH的峰十分微弱,请问各位高手:

第一,是否NADH二钠盐与NADH出峰时间不一致,还是流动相不适合导致NADH出峰不明显?

第二,NAD的峰与其他杂质峰分得不是很开,而NADH的分离度较好。样品的ph值约为6.5。

所以请问:有什么办法可以使峰的分离度更好些?

谢谢!
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中药2000

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【答案】应助回帖

laoyisng1122(金币+1): 非常感谢! 2011-06-21 12:01:11
供试品也可考虑纯化一下。
3楼2011-06-20 16:18:58
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

呵呵,分的不开是很常见的,需要优化流动相。
2楼2011-06-20 16:18:26
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)


novus(金币+1): 可以尝试调整流动相pH值呢? 2011-06-22 22:45:28
引用回帖:
Originally posted by 中药2000 at 2011-06-20 16:18:58:
供试品也可考虑纯化一下。

谢谢! 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了,再高不太好吧,磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低,因为能检测到另一种物质NAD。
4楼2011-06-21 12:02:11
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