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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[求助] 液相检测,有什么办法可以使峰的分离度更好些???

NADH的色谱检测
我正在做胞内NAD、NADH的检测,目前用HPLC检测,我用的流动相是
(乙腈:含有10mM四丁基溴化铵的300mM 磷酸钠缓冲液ph7.0=4:96),色谱柱:C18反相柱。
NADH标准品用的是NADH二钠盐(买不到NADH),
检测样品中的NAD的峰比较明显,但NADH的峰十分微弱,请问各位高手:

第一,是否NADH二钠盐与NADH出峰时间不一致,还是流动相不适合导致NADH出峰不明显?

第二,NAD的峰与其他杂质峰分得不是很开,而NADH的分离度较好。样品的ph值约为6.5。

所以请问:有什么办法可以使峰的分离度更好些?

谢谢!
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naren4545

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

减小有机相的比例、调解PH、试试亲水色谱等!
2楼2011-06-20 14:42:09
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kandengren

金虫 (小有名气)

青虫

也可以换根长柱子,或者换个别的C18柱子试试
3楼2011-06-20 15:51:52
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

样品对pH敏感吗,调节pH试试?还可以换其他的离子对试剂试一试。
学无止境
4楼2011-06-20 16:13:40
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zgf340631735 at 2011-06-20 16:13:40:
样品对pH敏感吗,调节pH试试?还可以换其他的离子对试剂试一试。

谢谢! 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了,再高不太好吧,磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低,因为能检测到另一种物质NAD。
5楼2011-06-21 12:02:23
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by kandengren at 2011-06-20 15:51:52:
也可以换根长柱子,或者换个别的C18柱子试试

谢谢! 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了,再高不太好吧,磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低,因为能检测到另一种物质NAD。
6楼2011-06-21 12:02:35
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小醇醇

木虫 (正式写手)

攀登者~

【答案】应助回帖

水相比例是多少啊?

如果像你说的 已经很低了 那就只要换长柱子试试了~
即使是走过无数次的路,也能走到从未踏足过的地方;正因为是走过无数次的路,景色才会变幻万千
7楼2011-06-21 13:14:48
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kandengren

金虫 (小有名气)

青虫

买根AQ-C18柱子试试
8楼2011-06-21 21:25:48
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tiger333

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

把流动相pH值调到6.5甚至更低试试。
9楼2011-06-21 22:06:00
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

NADH不稳定,在该实验条件下很容易转化成NAD+
10楼2013-04-28 10:56:07
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