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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 液相检测，有什么办法可以使峰的分离度更好些？？？
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[求助] 液相检测，有什么办法可以使峰的分离度更好些？？？

NADH的色谱检测
我正在做胞内NAD、NADH的检测，目前用HPLC检测，我用的流动相是
（乙腈：含有10mM四丁基溴化铵的300mM 磷酸钠缓冲液ph7.0=4:96），色谱柱：C18反相柱。
NADH标准品用的是NADH二钠盐（买不到NADH），
检测样品中的NAD的峰比较明显，但NADH的峰十分微弱，请问各位高手：

第一，是否NADH二钠盐与NADH出峰时间不一致，还是流动相不适合导致NADH出峰不明显？

第二，NAD的峰与其他杂质峰分得不是很开，而NADH的分离度较好。样品的ph值约为6.5。

所以请问：有什么办法可以使峰的分离度更好些？

谢谢！
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1楼 2011-06-20 14:37:47
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naren4545

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

减小有机相的比例、调解PH、试试亲水色谱等！
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2楼2011-06-20 14:42:09
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kandengren

金虫 (小有名气)

青虫
也可以换根长柱子，或者换个别的C18柱子试试
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3楼2011-06-20 15:51:52
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

样品对pH敏感吗，调节pH试试？还可以换其他的离子对试剂试一试。
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学无止境
4楼2011-06-20 16:13:40
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zgf340631735 at 2011-06-20 16:13:40:
样品对pH敏感吗，调节pH试试？还可以换其他的离子对试剂试一试。

谢谢！ 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了，再高不太好吧，磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低，因为能检测到另一种物质NAD。
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5楼2011-06-21 12:02:23
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by kandengren at 2011-06-20 15:51:52:
也可以换根长柱子，或者换个别的C18柱子试试

谢谢！ 目前还未找到纯化样品的方法

水相的比例已经很高了，再高不太好吧，磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了

换甲醇好像也不行。

样品浓度应该不是很低，因为能检测到另一种物质NAD。
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6楼2011-06-21 12:02:35
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小醇醇

木虫 (正式写手)

攀登者~

【答案】应助回帖

水相比例是多少啊？

如果像你说的 已经很低了 那就只要换长柱子试试了~
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即使是走过无数次的路，也能走到从未踏足过的地方；正因为是走过无数次的路，景色才会变幻万千
7楼2011-06-21 13:14:48
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kandengren

金虫 (小有名气)

青虫
买根AQ-C18柱子试试
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8楼2011-06-21 21:25:48
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tiger333

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

把流动相pH值调到6.5甚至更低试试。
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9楼2011-06-21 22:06:00
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

NADH不稳定，在该实验条件下很容易转化成NAD+
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10楼2013-04-28 10:56:07
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