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yangxicshe

铁虫 (小有名气)

[求助] 液相 分析样品出现分裂峰？ 这可怎么办啊？？

用HPLC-ECD分析样品出现分裂峰
流动相0.1M柠檬酸，0.1M乙酸钠，100uM EDTA， 0.01%SOS (5%甲醇)
1.出峰时候还是随着时间往后移（例如第一针4分出峰，第二针4.5分出峰，第三针4.8分出峰）
2.峰有拖尾现象
3.有分裂峰（重新培养品，还是有分裂峰），检查了柱子，很干净

本人菜鸟不会再帖子中传图片，只能上传附件了，请各位大侠指点

图是相同样品同一浓度的两次图（图一没有加5%甲醇，图二加了5%甲醇）
（pump: waters 1525
   ECD: water 2465
   column: ODS）
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1楼 2011-06-16 11:48:11
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

yangxicshe(金币+1): 非常感谢！ 2011-06-16 13:45:25
1.出峰时候还是随着时间往后移（例如第一针4分出峰，第二针4.5分出峰，第三针4.8分出峰）
2.峰有拖尾现象
3.有分裂峰（重新培养品，还是有分裂峰），检查了柱子，很干净


1、
这种情况下，保留时间呈递增，有四原因。
a、柱温为控制。保留时间随环境变化而变化，高温，保留时间缩短，反之延长。
b、流动相组分变化，如蒸发，又如沉淀。蒸发使甲醇比例降低，流动相洗脱能力减弱，保留时间延长；蒸发沉淀等变化，使流动相pH发生改变，若样品酸性，pH降低，保留时间延长，若样品碱性，pH升高，保留时间延长。样品中性，pH几乎无影响。
c、色谱柱键合相流失。（检查柱效）
d、硅胶柱活性点变化。（加三乙胺或碱，钝化可避免）

2、
峰拖尾，这种情况下，原因可能为
a、柱超载。（降低进样量）
b、色谱柱硅羟基作用。（加三乙胺，屏蔽硅羟基活性）
c、柱坍塌。（检查柱效）

3、
原因：
1、进样体积过大。
2、进样量过载。
3、柱坍塌。
4、进样器损坏。（更换进样转子）


综上。。。不用俺总结了吧。。。。
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守候在风中的宁静。
2楼2011-06-16 12:15:22
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-06-16 19:13:36
此外还有一些原因会导致上面的问题：
1.系统漏液；
2.尽量避免使用强溶剂溶解样品，会导致峰变形或分叉；
3.使用合适pH的溶剂，避免使样品在溶剂中既有离子态又有分子态，这样也会导致峰分叉或变形。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
3楼2011-06-16 13:07:57
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yangxicshe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-06-16 12:15:22:
1.出峰时候还是随着时间往后移（例如第一针4分出峰，第二针4.5分出峰，第三针4.8分出峰）
2.峰有拖尾现象
3.有分裂峰（重新培养品，还是有分裂峰），检查了柱子，很干净


1、
这种情况下，保留时间呈递增， ...

多谢指点。
我们现在用的柱子是15厘米*4.6毫米的，柱体积应该是1.5毫升，我们进样20微升应该没有问题吧。（博士后之前让我进10微升，但是让指导我做实验的前辈给否了，但我进20微升）
另外，我们检查了柱子似乎没有坍塌。。。可不可能是因为长期用缓冲溶液柱子有无机盐沉积造成的（我们一直只用甲醇洗柱子），正确清洗一下柱子是不是有效，应该如何操作？
另外您说的：“硅胶柱活性点变化。（加三乙胺或碱，钝化可避免）”和“色谱柱硅羟基作用。（加三乙胺，屏蔽硅羟基活性）”，我没懂，是在流动相中家吗？三乙胺是碱性的吧，可是我们要用PH3.5的酸性缓冲液
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4楼2011-06-16 13:45:34
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by yangxicshe at 2011-06-16 13:45:34:
多谢指点。
我们现在用的柱子是15厘米*4.6毫米的，柱体积应该是1.5毫升，我们进样20微升应该没有问题吧。（博士后之前让我进10微升，但是让指导我做实验的前辈给否了，但我进20微升）
另外，我们检查了柱子似 ...

另外您说的：“硅胶柱活性点变化。（加三乙胺或碱，钝化可避免）”和“色谱柱硅羟基作用。（加三乙胺，屏蔽硅羟基活性）”，我没懂，是在流动相中家吗？三乙胺是碱性的吧，可是我们要用PH3.5的酸性缓冲液 流动相酸性，加三乙胺那就算了。还有一种改善拖尾的方法就是加入缓冲盐，但你的盐浓度已经非常高了，一般也就0.01M~0.02M左右。
可不可能是因为长期用缓冲溶液柱子有无机盐沉积造成的（我们一直只用甲醇洗柱子），正确清洗一下柱子是不是有效，应该如何操作？
缓冲盐要正确使用啊。使用不当，堵塞色谱柱填料基质间空隙，会使柱压升高保留时间缩短柱效下降的。。。缓冲液使用后，色谱柱先用大比例水冲洗，再改用大比例有机相清洗。譬如：90/10（1h）——10/90（30min+）。。。再保存色谱柱。
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守候在风中的宁静。
5楼2011-06-16 14:49:27
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是你2012

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
1192377楼: Originally posted by leecius at 2011-06-16 13:07:57
此外还有一些原因会导致上面的问题：
1.系统漏液；
2.尽量避免使用强溶剂溶解样品，会导致峰变形或分叉；
3.使用合适pH的溶剂，避免使样品在溶剂中既有离子态又有分子态，这样也会导致峰分叉或变形。

我也在用液相检测物质，也是以前不会出现分峰，现在呢，同样额样品进样之后，出现分峰，但是加起来的峰面积和以前是一样的。。。
     有次做实验，系统提示说漏液，停止工作，可是又检查不出来。。。不知道您能不能给我什么好的建议。。。
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6楼2013-04-01 14:46:51
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