应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pGEM-T Easy载体的相关问题-讨论
51/1返回列表
查看: 1845  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] pGEM-T Easy载体的相关问题-讨论

大家出来讨论一下吧：
细菌的某个基因发生改变，要看它对细菌其他基因表达水平的影响，就需要将未突变的这段基因连接到载体上，在将其转入存在突变的菌体内，对比转化前后的不同，而得出结论。本实验室没有做过相关实验，请各位说说该实验的难易？注意事项？关键环节？连接体系........
谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zhouying_613

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-06-08 11:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-08 14:25:04:
这个比较容易做。。。
首先你要先将目的基因（就是你要检测该基因是否在突变体中的表达发生变化了）和载体连接上，当然这个是连接问题了，连接我觉得楼主应该没有什么问题吧？

其实验证连接好之后，将重组载体 ...

谢谢您，我才开始设计实验，还没有开始做，想跟大家取取经，省的走太多的弯路。想问一下问题：
1.目的基因如果用的是Taq 聚合酶是不是就不用进行加尾A反应了？
2.连接是，连接时目的基因和载体的摩尔比是3:1-1:3，那目的DNA的魔都怎么确定呢？
3.将重组质粒转入临床分离株（含突变位点）时，有哪些转化方法？
谢谢您，初次做，望多指教！！！
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-08 16:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zhouying_613

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
1949stone(金币+1): 鼓励交流 2011-06-08 16:17:17
475502411(金币+1): 2011-06-08 17:18:08
实验流程很容易，但是不知道和你的标题T-vector有啥关系？
而且如果是我设计实验，我肯定是拿突变菌株和野生型做比较，看你要研究的那几个基因的表达差异。你这是要做恢复突变，确认表型的吧？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-06-08 12:15:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
475502411(金币+1): 2011-06-08 17:18:15
是啊，你标题上的载体是做克隆用的，不是做表达用的哦。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-08 13:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-06-08 14:44:24
475502411(金币+5): 2011-06-08 16:29:59
这个比较容易做。。。
首先你要先将目的基因（就是你要检测该基因是否在突变体中的表达发生变化了）和载体连接上，当然这个是连接问题了，连接我觉得楼主应该没有什么问题吧？

其实验证连接好之后，将重组载体转化进突变体中，同时将该重组载体转化进野生型菌中，然后对比两个重组载体上的目的基因的表达是否发生变化，当然了，这个后期检测可以用发光，表达量等等来检测。。。

其实还有另外一种方法可以达到楼主的需要，就是DNA microassay.你可以将你的突变体的mRNA提取出来，然后反转录成cDNA,然后交由生物公司做一个基因芯片，这样你就会知道你的突变体里面哪些基因的表达发生变化了，就方便你寻找整调节或者负调节的基因了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-08 14:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 280求调剂 +7 咕噜晓晓 2026-03-18 8/400 2026-03-21 01:27 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 326求调剂 +4 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 7/350 2026-03-16 17:11 by 诺贝尔化学奖觊�
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭