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pGEM-T Easy载体的相关问题-讨论
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大家出来讨论一下吧： 细菌的某个基因发生改变，要看它对细菌其他基因表达水平的影响，就需要将未突变的这段基因连接到载体上，在将其转入存在突变的菌体内，对比转化前后的不同，而得出结论。本实验室没有做过相关实验，请各位说说该实验的难易？注意事项？关键环节？连接体系........ 谢谢！ |
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天使托
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-06-08 14:44:24
475502411(金币+5): 2011-06-08 16:29:59
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dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-06-08 14:44:24
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这个比较容易做。。。 首先你要先将目的基因（就是你要检测该基因是否在突变体中的表达发生变化了）和载体连接上，当然这个是连接问题了，连接我觉得楼主应该没有什么问题吧？ 其实验证连接好之后，将重组载体转化进突变体中，同时将该重组载体转化进野生型菌中，然后对比两个重组载体上的目的基因的表达是否发生变化，当然了，这个后期检测可以用发光，表达量等等来检测。。。 其实还有另外一种方法可以达到楼主的需要，就是DNA microassay.你可以将你的突变体的mRNA提取出来，然后反转录成cDNA,然后交由生物公司做一个基因芯片，这样你就会知道你的突变体里面哪些基因的表达发生变化了，就方便你寻找整调节或者负调节的基因了。 |
4楼2011-06-08 14:25:04
2楼2011-06-08 12:15:18
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