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长乐未央_CL

新虫 (小有名气)

[求助] 样品与SDS煮沸后的样品冰箱冷藏能保存多久？这样的变性样品在期间会降解吗？

样品与SDS煮沸后的样品冰箱冷藏能保存多久？这样的变性样品在期间会降解吗？请问附件图片中的背景很重是因为样品降解的原因吗？谢谢
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1楼 2011-06-03 20:03:55
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 同意 2011-06-04 12:25:46
蛋白质与loading buffer混合后煮沸变形后放在冰箱中储存应该是不会降解的，你这个是不是跑胶的问题，跑胶缓冲溶液用过太多次，还有就是电压
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2楼2011-06-04 12:23:27
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yj507

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很有经验哦，分析得很好，EPI当之无愧！ 2011-06-07 00:17:44
与loading煮过的蛋白样品在4度放的话会降解的，不过不会这么快，可能1个月左右开始吧，－20放会好些。看你的图所有的条带都不清晰，可能是胶配制或跑电泳的问题，不知道你的marker条带是否清晰，如果也不清晰更可能是胶的问题；另外在冰箱里低温跑电泳效果会好些。
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3楼2011-06-04 13:11:45
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good！ 2011-06-07 00:18:48
用一个新鲜的同源样品跟旧样一起跑一下就能找到原因了，做实验自己去排除问题是很重要的。除了LS说的原因为，还有一个可能是你的样品本身就是很杂，比如菌体的总蛋白提取液，加之你上样量过大，就会得到这种成片的条带。。。
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摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-06-06 08:47:37
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mygoalcas

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励新虫交流！又给了一个可能原因呢。 2011-06-07 00:19:32
我以前也碰到过这种情况，我的更严重些，是直接看不到蛋白条带，就跟彗星的尾巴一样，后来发现是5 X 上样缓冲液时间太长失效了。强烈建议你重配loading buffer
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5楼2011-06-06 23:34:32
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mygoalcas

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 热心哦！您的问题可以另外发一贴，可以让跟多人关注。 2011-06-07 00:20:22
刚才上百度又看到了几条原因，给你贴过来参考一下

7. 为什么带出现拖尾现象？ 　　主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。 　　处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。

楼主能不能帮我分析下为什么我的浓缩胶凝固时间太短，以前也是这个配方，但现在就不行了，还不等插梳子的就凝了，好郁闷，他们有的说是夏天温度太高，聚合太快
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6楼2011-06-06 23:46:44
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gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-07 16:53:26
引用回帖:
Originally posted by mygoalcas at 2011-06-06 23:46:44:
刚才上百度又看到了几条原因，给你贴过来参考一下

7. 为什么带出现拖尾现象？ 　　主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。 　　处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳 ...

夏天温度高了，不管是分离胶还是浓缩胶，结合的都会快一些。我们冬天都是放烘箱里聚合的，现在直接室温就行了
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7楼2011-06-07 14:46:14
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by terry130 at 2011-06-06 08:47:37:
用一个新鲜的同源样品跟旧样一起跑一下就能找到原因了，做实验自己去排除问题是很重要的。除了LS说的原因为，还有一个可能是你的样品本身就是很杂，比如菌体的总蛋白提取液，加之你上样量过大，就会得到这种成片的 ...

同样的操作不一定有同样的结果，有时候确实要不断的自我排除原因，
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8楼2011-06-07 17:01:02
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chunqizzm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！再接再厉哈~ 2012-03-20 08:47:12
最好是同时跑一个Marker，不单单是定分子量时能用到Marker，还可以在出现问题时帮忙排除大部分可能性更容易找到具体的原因。
单单从你贴的图上看可能的原因：
1.样品盐浓度过高；
2.电泳缓存液出问题；
3.配胶出错（上面已经有人提过）；
还有就是看LZ，问完问题后就没有回复过，这个习惯可不好。而且最后活跃时间是2011.10.06
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9楼2012-03-19 23:10:10
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