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小嫩瓜木虫 (小有名气)
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[求助]
从复合菌系中分离单菌进行纯化培养——有做这方面的朋友吗？
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我们实验室通过富集培养得到了这么一种能够降解纤维素的复合菌系，我现在的任务就是想把复合菌系中能培养的菌分离出来。。。。可是涂布了好多批，每次长的菌都不一样。 我都不知道该如何往下进行，想看看有没有做这方面的朋友，给予一点指导一点建议  |
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brightfuture01
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【答案】应助回帖
小嫩瓜(金币+1): 复合菌系是我师兄他们富集培养的，做了差不多半年，说是复合菌系是稳定的 2011-06-02 09:17:17
| How many subculture have you done? If it is stable? I think your should subculture your microorganism community at least 30 or more times. I got from a dissertation that the author repeat the subsculture for half a year. |
2楼2011-06-02 09:04:29
newtime007
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【答案】应助回帖
小嫩瓜(金币+1): 恩，我不只是要筛选分离出纤维素分解菌，里面也有非纤维素培养菌，我要尽可能多的分离得到单菌。 2011-06-02 09:18:34
amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-06-02 20:48:32
amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-06-02 20:48:32
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主要途径就是先在固体培养基上分离。采用平板划线法分离和纯化菌落；把菌 落打碎，进行无菌稀释，吸取稀释菌液到平板上涂匀，在平板上加盖一张无菌滤纸，保湿培养；根据透明圈的大小，选择目标菌分别接入液体培养基中发酵实验，从中选出降解能力强（或产糖量相对高）的菌。 可参考以下文献： 1.能降解秸秆类纤维素细菌的分离方法 CN200410043862.9 2.一种嗜热厌氧纤维素降解细菌的分离纯化方法 ：《微生物学通报》2000年第05期 韩如旸等 |
3楼2011-06-02 09:11:39
brightfuture01
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4楼2011-06-02 09:20:59
小嫩瓜
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5楼2011-06-02 09:26:35
brightfuture01
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【答案】应助回帖
小嫩瓜(金币+1): 2011-06-02 10:35:39
小嫩瓜(金币+7): 2011-06-02 16:50:47
小嫩瓜(金币+7): 2011-06-02 16:50:47
| It is OK. I think you should always use the same one culture medium for all isolation experiment, and always chose a suitable dilution. It is normal that you got different species from several isolation experiment, because, maybe, there are too many species in the community. I think, you can pick up any bacterium species from the dish. |
6楼2011-06-02 10:06:13
|
恩 |
7楼2011-06-02 10:35:53
redbull2011
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5, EPI+1): 谢谢交流哦~ 2011-06-03 08:54:44
scelab(金币+5, EPI+1): 谢谢交流哦~ 2011-06-03 08:54:44
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恰巧我正在做这方面的实验，我的方法供楼主参考： 1、首先明确细菌的培养条件，需氧？厌氧？对营养要求高不高？（尽量选营养丰富的培养基）； 2、将混合菌种不稀释涂平板，看目标活性菌是否在平板上生长； 3、将混合菌种稀释后涂板，多涂几个梯度，得到长满单个菌落的平板。比如一块平板有40个菌落，那将这40个全部培养起来，分成四组，每组菌混合后验证是否有产物，全部40个菌混合实验作为对照；如果其中某组有产物，则将这10个菌分为两组，再验证；最后验证少数几个单菌。 我自己这么做的，筛选得到三个菌，它们共同作用得到某个产物。 |
8楼2011-06-02 17:57:09
小嫩瓜
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9楼2011-06-03 14:09:28
redbull2011
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10楼2011-06-03 19:41:25