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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[求助] 采用巢式PCR扩增

最近一直用巢式PCR扩增目的片段,P了好久就不出来,想听听各位虫虫的建议
外侧引物的TM值分别为63.3、67.1
内侧引物的TM值分别为51.2、53.0(不算酶切位点的TM值)
                     71.2、72.2(包括酶切位点的TM值)
用什么条件P会好些?
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elapse1113

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ljx2ljx at 2013-05-16 22:10:50
您好,我做巢式PCR做了一周多了,用特异性引物和此模板可以扩增出来,第一轮一直没有东西,第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了,但是还是不行。可能原因有哪些呢?...

你后来做出来了吗?怎么出的条带?
5楼2015-07-09 19:32:14
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