| 查看: 931 | 回复: 1 | ||
biofeixue木虫 (著名写手)
|
[求助]
请教RNA逆转及引物设计的各种，急！请大家多多帮助！
|
|
这一些是拟南芥的一些基因（AT5G62690、At2g41110、At3g56800、At1g66410、At2g27030、At5g21274、At3g43810、At4g14640、At3g51920、 At5g37780），我从http://www.arabidopsis.org/以及NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，可是发现他们很大一部分没有ployA尾巴，因为以前没有做过分子，所以想请教一下他们在RNA逆转录成cDNA时能不能用oligo(d)T做引物？如何把它们从总RNA逆转录成cDNA？ AT5G62690是拟南芥Tub2的基因，我看到以下两篇文章都是从总RNA逆转录成cDNA 时就是用的oligo(d)T做引物，用Tub2做内参，可我查的Tub2没有polya呀？为什么？ 1. Genji Qin, Hongya Gu, Ligeng Ma，et al. Disruption of phytoene desaturase gene results in albino and dwarf phenotypes in Arabidopsis by impairing chlorophyll, carotenoid, and gibberellin biosynthesis. Cell Research (2007) 17:471-482. 2. Genji Qin, Hongya Gu, Yunde Zhao, et al. An Indole-3-Acetic Acid Carboxyl Methyltransferase Regulates Arabidopsis Leaf Development. The Plant Cell, Vol. 17, 2693–2704, October 2005 如果有人能帮我解决我遇到的一系列问题，我愿意请版主将我的500金币转给帮我的人！ 我的QQ号，171736752。不知大家能不能在QQ上留个电话，我当面请教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
第一次独立答复专利审查意见，才发现这活跟毕业答辩是一个套路
已经有24人回复
-
使用QE质谱仪检测杂质含量
已经有0人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有171人回复
-
帮学院整理搁置专利清单时发现一半快到年费期，聊聊几条盘活的路子
已经有19人回复
-
师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？
已经有9人回复
-
实验室折腾了三年的自制设备要不要申请专利？跟导师争了一晚上没吵明白
已经有11人回复
-
入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍
已经有6人回复
-
搬家整理出五年前的失败实验记录，导师说这些"废数据"先别扔
已经有4人回复
-
做AI的同门问我他那个预测模型能不能申请专利，我查完发现答案有点绕
已经有1人回复
-
花一个周末自己动手查了查专利数据库，才知道当年组的申请有多盲目
已经有1人回复
-
组里一件授权专利被提无效了，组会开成了一次大型普法现场
已经有27人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 申phd一定要套磁吗？诚心请教各位师兄师姐
已经有12人回复
- RAPD标记有问题，虚心请教。。。。
已经有5人回复
- 为更好促进电化版发展，看看大家来电化版主要动机(参与并回复，有金币奉送)
已经有86人回复
- 请教含仲胺基的化合物如何过柱
已经有5人回复
- PCR最短可以P多少bp，求大家帮我设计引物！
已经有7人回复
- 【求助/交流】紧急求助~~ 关于简并引物设计 codehop 和genefisher 在线
已经有12人回复
- 请教设计实时定量引物的问题（有效期至2011年1月15号）
已经有2人回复
- 【求助/交流】新手请教如何对不同物种中某一酶的氨基酸序列进行比对再设计简并引物啊�
已经有10人回复
- 急求：构建载体时引物设计的问题
已经有7人回复
jhu132llh
荣誉版主 (知名作家)
大洪
- APEPI: 16
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.07
- 金币: 11622.1
- 散金: 796
- 红花: 30
- 沙发: 1
- 帖子: 5128
- 在线: 317小时
- 虫号: 1095066
- 注册: 2010-09-10
- 性别: GG
- 专业: 生殖生物学
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
biofeixue(金币+10): 谢谢！cDNA不是用mRNA逆转录的吗？为什么没有polyA 2011-05-30 09:11:41
|
1.NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，可是发现他们很大一部分没有ployA尾巴 很正常的 因为NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，记住是cDNA序列，不是RNA序列，所以没有ployA尾是很正常的 2.只要是提取的总RNA，你就可以用oligo(d)T引物来做反转录，当然了家电随机引物也是更好的 3.如何从总RNA逆转录成cDNA 这个原理比较简单： 反转录酶在RNA为模板，以oligo(d)T为引物，从ployA尾开始把RNA反转录为cDNA，再把RNA剪切掉，最后就只剩下cDNA 方法的话： 可以买一个试剂盒 一步法和两步法都可以 试剂盒里该有的都有了 然后严格按照试剂盒的操作说明来做就可以的了 按照我们实验室的经验。个人觉得两步法的效果要更好点 |
2楼2011-05-30 08:53:29
