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biofeixue木虫 (著名写手)
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[求助]
请教RNA逆转及引物设计的各种，急！请大家多多帮助！
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这一些是拟南芥的一些基因（AT5G62690、At2g41110、At3g56800、At1g66410、At2g27030、At5g21274、At3g43810、At4g14640、At3g51920、 At5g37780），我从http://www.arabidopsis.org/以及NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，可是发现他们很大一部分没有ployA尾巴，因为以前没有做过分子，所以想请教一下他们在RNA逆转录成cDNA时能不能用oligo(d)T做引物？如何把它们从总RNA逆转录成cDNA？ AT5G62690是拟南芥Tub2的基因，我看到以下两篇文章都是从总RNA逆转录成cDNA 时就是用的oligo(d)T做引物，用Tub2做内参，可我查的Tub2没有polya呀？为什么？ 1. Genji Qin, Hongya Gu, Ligeng Ma，et al. Disruption of phytoene desaturase gene results in albino and dwarf phenotypes in Arabidopsis by impairing chlorophyll, carotenoid, and gibberellin biosynthesis. Cell Research (2007) 17:471-482. 2. Genji Qin, Hongya Gu, Yunde Zhao, et al. An Indole-3-Acetic Acid Carboxyl Methyltransferase Regulates Arabidopsis Leaf Development. The Plant Cell, Vol. 17, 2693–2704, October 2005 如果有人能帮我解决我遇到的一系列问题，我愿意请版主将我的500金币转给帮我的人！ 我的QQ号，171736752。不知大家能不能在QQ上留个电话，我当面请教！ |
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jhu132llh
荣誉版主 (知名作家)
大洪
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- 专业: 生殖生物学
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
biofeixue(金币+10): 谢谢！cDNA不是用mRNA逆转录的吗？为什么没有polyA 2011-05-30 09:11:41
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1.NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，可是发现他们很大一部分没有ployA尾巴 很正常的 因为NCBI上中找到这些基因的cDNA序列，记住是cDNA序列，不是RNA序列，所以没有ployA尾是很正常的 2.只要是提取的总RNA，你就可以用oligo(d)T引物来做反转录，当然了家电随机引物也是更好的 3.如何从总RNA逆转录成cDNA 这个原理比较简单： 反转录酶在RNA为模板，以oligo(d)T为引物，从ployA尾开始把RNA反转录为cDNA，再把RNA剪切掉，最后就只剩下cDNA 方法的话： 可以买一个试剂盒 一步法和两步法都可以 试剂盒里该有的都有了 然后严格按照试剂盒的操作说明来做就可以的了 按照我们实验室的经验。个人觉得两步法的效果要更好点 |
2楼2011-05-30 08:53:29