| 查看: 2825 | 回复: 7 | |||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||||
[交流]
琼脂糖凝胶电泳 基本常识 已有7人参与
|
|||||||
|
琼脂糖凝胶电泳对于现在的生物学操作就是小儿科，但是下面的一些小技巧您知道吗？ 1 凝胶制作 1.1 给胶补点水：在日常的实验中一般都是一次多配点凝胶，下次融后直接使用。但有没有注意随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果不稳定。 补水办法：一是在容器上标记煮胶前的刻度，煮胶后补充相应的水分至原刻度；二是在煮胶前称重，煮胶后补充水至原重量。粗略一点的方法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值。以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。核酸染色剂溴化乙锭(EB)可加在融化的琼脂糖中，终浓度为0．5 t*g／ml；也可在电泳结束后染色。 1.2 加速凝固：一般凝胶需冷却30 min以上方可拔梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块放4℃ 冰箱中冷却15 min 左右。 2 点样 上样缓冲液中一般加了两种指示剂，溴酚兰和二甲苯青(值得注意的是指示剂并非染色剂，DNA染色剂是溴化乙锭，而且要在紫外光的激发下才能看见桔红色荧光)。上样缓冲液储存液一般为6× (10×)，使用时上样缓冲液应稀释到一倍浓度。点样方法是将移液器基本垂直点样孔，用另一只手帮助固定移液器下端，移液器枪头(Tip)尖端进入点样孔即可将样品注入孔内，千万不可将Tip尖插至孔底。 3 电泳 电泳槽中电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同，电泳缓冲液刚好没过凝胶1 mm 为好，电泳缓冲液太多则电流加大，凝胶发热。电泳时凝胶上所加电压一般不超过5 v／cm(指的是正负电极之间的距离，而不是凝胶的长度)，电泳时间一般为3O～60 min，根据实验需要也可作适当调整，电压增高，电泳时间缩短，核酸条带相对来说不够整齐，不够清晰；相反，电压降低，电泳时间较长，核酸条带整齐清晰。另外，如果电泳后样品泳动很慢或者没泳动，请检查胶模两端的封口胶条是否已去掉。 4 结果分析 较成功的电泳结果是分子量标准条带整齐清晰，样品条带也整齐清晰，如果条带模糊暗淡，单从琼脂糖凝胶电泳角度来说，可能的原因：溴化乙锭的质和量怎样?溴化乙锭见光易分解，母液配制时间过长或保存不当(一般4℃ 避光保存一年内有效)，或者终浓度没达到0．5 vg／ml；电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，一般用2～3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 实际工作中经常发现DNA 分子量标准小片段模糊不清，那足因为琼脂糖凝胶浓度一般不会超过20％ ，较小的核酸片段 在它的分辨范围之内，并且EB带正电荷，电泳时会向负傲移动，如果将凝胶置含EB的水溶液中30 min，较小的片段则可重新染色：另外，溴化乙锭(EB)是一种中等强度诱变剂，操作过程中要戴手套，并将加有EB的染色液作好标记、妥善保存 。 另附DNA电泳常见问题分析：  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 阿江传奇 | 缓冲溶液配制 | 凝胶电泳 | 前人经验 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
huihui131» 猜你喜欢
化学-化工-材料-食品-生物-环境2026年研究生调剂（可以不考数学）
已经有0人回复
-
化学-化工-材料-食品-生物-环境-农业 2026年研究生调剂（可以不考数学）
已经有1人回复
-
分析化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
070300一志愿211，312分求调剂院校
已经有12人回复
-
26年储能、电池方向博士申请
已经有0人回复
-
070300化学求调剂
已经有12人回复
-
青岛大学化学化工学院2026年招收调剂硕士研究生
已经有0人回复
-
北方工业大学085808储能技术-02方向（电池）接收调剂生
已经有0人回复
-
272求调剂，接受跨专业调剂！
已经有3人回复
-
有一区TOP论文，求调剂
已经有20人回复
-
大连工业大学杰青/长江团队-生物质材料-储能电池方向招收2026级博士生
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 琼脂糖凝胶电泳
已经有11人回复
- 琼脂糖凝胶电泳跑的时间长了是不是就会出现拖尾呀？
已经有10人回复
- 琼脂糖凝胶电泳结果
已经有6人回复
- DNA琼脂糖凝胶电泳
已经有21人回复
- 琼脂糖凝胶电泳分析
已经有10人回复
- 琼脂糖凝胶电泳图分析
已经有40人回复
- 琼脂糖凝胶电泳，跑的条带有点难看
已经有15人回复
- 琼脂糖凝胶电泳
已经有10人回复
- 【求助/交流】琼脂糖凝胶电泳的诅咒
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于琼脂糖凝胶电泳
已经有20人回复
- 【求助/交流】凝胶电泳--EB什么时候加
已经有30人回复
- 【求助/交流】琼脂糖凝胶DNA电泳失败
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教琼脂糖凝胶电泳问题
已经有18人回复
8楼2017-06-19 11:00:26
hjyxm
管理员
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 5220.6
- 散金: 140
- 红花: 5
- 帖子: 535
- 在线: 270小时
- 虫号: 1107889
- 注册: 2010-09-26
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
2楼2011-06-01 23:56:29
boer1201
超级版主
 |
3楼2011-06-07 15:38:01
 本帖仅楼主可见 |
4楼2013-01-17 00:34:23
