| 查看: 4669 | 回复: 29 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
jayxj铁杆木虫 (小有名气)
|
[求助]
pMG36e 构建的奇怪现象
|
||
|
质粒构建在我们实验室已是常规操作，但是最近构建pMG36e时出现一个奇怪的问题： 转化后，在红霉素（200ug/ml）筛选LB培养基上，要么没有菌落，要么长出的菌落扩大后提不出质粒。（菌体抗药性突变？也太频繁了吧？几十个克隆都这样） 请各位帮忙分析下原因。 目的基因长度：1000~2000bp（几个基因）此载体也曾连上过300bp和2500bp的片段。 酶切位点：SacI和HindIII 感受态：全式金DH5a、自制高效感受态，已验证 质粒提取试剂盒：生工和鼎国小提试剂盒，已验证 连接酶：TaKaRa Solution I 和 T4连接酶，已验证 连接接比例：质粒:目的基因=1:4~1:10 连接时间：12~16小时 以上条件、试剂连接大肠杆菌载体（pcDNA3、pMD18-T、pTA2和pGEX4T-1）都未出现问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有159人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做硅铁合金中碳量分析时用扫描电镜扫样品（烧后）的形貌后遇到的奇怪现象，求解释！
已经有4人回复
- 二硝化反应奇怪现象
已经有5人回复
- endnote 插入引用后发生很奇怪的现象。。求帮助
已经有26人回复
- 关于ansys ls-dyna结果显示的一个奇怪现象求助
已经有10人回复
- 质粒构建出了奇怪的现象，实在找不到原因，请大家帮忙看看
已经有10人回复
- 【求助】重金属浸出出现的奇怪现象，求解？
已经有24人回复
- fluent使用之奇怪现象
已经有12人回复
- 用DMF还原铜的奇怪现象
已经有6人回复
- 转化后提不出质粒
已经有11人回复
- 奇怪的现象！沉淀处于两种互不相溶的不良溶剂界面？
已经有7人回复
- 构建克隆载体时出现的问题
已经有11人回复
- 很奇怪的连接产物
已经有5人回复
- 很奇怪的现象，有做有机氯农药检测的虫吗？关于DDT及其异构体的疑问~~
已经有11人回复
- 红外光谱有奇怪现象，请帮忙
已经有6人回复
- 陶瓷热腐蚀后SEM表面上的奇怪现象（有图）
已经有35人回复
- 【求助/交流】电泳跑胶时出现奇怪现象
已经有14人回复
- 【讨论】三氟乙酸脱保护后很奇怪的现象
已经有8人回复
- 【求助/交流】pcr的奇怪现象
已经有26人回复
- 【求助】过柱中发现的奇怪现象
已经有15人回复
- 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象
已经有13人回复
- 【求助】奇怪的现象，铜的表面生成一层蓝色松软物质是什么？
已经有10人回复
10楼2011-10-15 12:33:33