| 查看: 4352 | 回复: 20 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
WB结果不理想，呼唤帮助
|
|||
|
WESTERN BLOT新手，重复了好几次都快郁闷了。。。 第一张图是β-actin的结果，第一次的时候结果挺好的，可是不知道为什么最近几次都是这样，出来的条带不清楚而且很细。。。而且还有说不清的杂点，呼唤高手指点~~~ 具体实验操作： 从Hep G2细胞中用碧云天的中性裂解液提的蛋白，用的abmart的一抗，稀释比例1:4000（试用装，说明书中说可用1:5000做），二抗稀释比例1:4000。 上样蛋白100ug/20ul 分离胶浓度12%，电泳条件：100V，150min; 转膜条件：250mA, 70min; 5%脱脂奶粉封闭1h, 一抗4度孵育过夜 第二张图是硫酸转移酶蛋白的结果，蛋白源及提取方法、电泳、转膜条件如上。抗体应该没有问题，稀释比例按照说明进行。这个为什么条带之间界限不清楚，而且为什么在条带交际处显色较深？   [ Last edited by happy-j on 2011-5-17 at 23:59 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 有价值的生物经验贴 |
» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
利用别人的分析方法来分析自己的实验结果算不算抄袭？
已经有12人回复
- TEM自带软件给出的结果怎么分析
已经有11人回复
- 急求帮助我翻译成中文
已经有1人回复
- 做WB实验，关于抗体的选择？
已经有5人回复
- 尽快找回ISIS密码，登陆查询基金结果
已经有52人回复
- 求高手分析WB结果！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】wb时β-actin加完发光液不发光？
已经有4人回复
- 【求助/交流】WB老做不出来
已经有6人回复
- WORD使用STYLEREF插入页眉时 本来是脚标的结果在页眉上显示不出，怎么办？
已经有13人回复
- 【求助/交流】请教一下，如果做通道蛋白的免疫荧光和WB选哪家的抗体最好
已经有5人回复
- 【求助】拉伸实验结果怎么分析
已经有7人回复
- NCBI blast 结果一些参数的含义求高手指点
已经有12人回复
314300420
禁虫
- BioEPI: 3
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2193.1
- 散金: 2458
- 红花: 17
- 帖子: 1447
- 在线: 511.5小时
- 虫号: 851254
- 注册: 2009-09-18
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+6): 感谢参与，欢迎常来 2011-05-19 13:37:07
happy-j(金币+1): 第一次发帖求助，非常感谢提供解决意见。 2011-05-19 20:29:08
lstt09nk(金币+6): 感谢参与，欢迎常来 2011-05-19 13:37:07
happy-j(金币+1): 第一次发帖求助，非常感谢提供解决意见。 2011-05-19 20:29:08
|
内参的抗体是不是回收使用了？现在天气比较热，抗体容易失活效价变低，而且会产生杂点和高背景，建议不要回收。根据你内参的结果分析，主要原因就是荧光强度低，可提高抗体浓度，另外使用的发光液的敏感性很重要，好的ECL发光液可以节省抗体，降低背景值，Millipore的效果很不错（货号WBKLS0500）。 第二张图的结果，分析认为是上样量过大，100ug/泳道，已经过载，超过了凝胶的分辨率，相邻孔的蛋白已经连在一起了，效果和没有梳子是一样的。你可以看看100ug的上样量，考马斯亮蓝染色的结果是什么样的，再对比下20ug的上样量是什么效果。 |
3楼2011-05-19 09:41:41
2楼2011-05-18 21:37:46
天涯萧客
兑换贵宾
放羊大叔
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1038.3
- 散金: 15
- 帖子: 353
- 在线: 166.2小时
- 虫号: 756987
- 注册: 2009-04-25
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
4楼2011-05-19 11:33:40
~~~~ 5楼2011-05-19 20:39:40
