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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用分光计怎么样测酶活?
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wolfebst(金币+5, EPI+1): 鼓励一下 2011-05-17 15:56:31
所谓的分光计发测酶活是一种间接方法，首先寻找到具有紫外可见光吸收的底物，然后用标准曲线法换算酶活（如酪蛋白酶）。所以你需要找到能有紫外可见光吸收之底物，估计脂肪类没有，因此你还是滴定检测吧。另外可试试下边的
原理：用酸价作指标， 用95%乙醇作终止剂， 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度， 从而求得酶活力。

方法：

1、粗酶液的制备

用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 mL， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

2、酸价的测定

酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数， 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价， 参照文献[ 3， 4 ]中所使用的方法， 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液， 摇匀， 终止反应， 并加入2滴酚酞指示剂， 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色， 在30 s内不消失为终点， 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。用同样的方法测定空白值， 每个试验重复两次， 以平均值作为测定结果。

酸价按下式计算：
X = C (V - V0 ) ×40 /M
式中: X —油脂酸价(mgNaOH /g油)
C—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)
M —试样的质量( g)
40—NaOH的mmol质量(mg/mmol)

3粗脂肪酶活力的测定

在最佳水解条件下， 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 ， 根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力， 其中U1为粗脂肪酶活力， U为标准脂肪酶活力。
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上善若水，水善利万物而不争
3楼2011-05-17 15:37:41
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