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我刚开始学习做分子生物学实验，好多方面还不很懂，这张图是我做的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物拍的照，我基本上都是按照操作步骤做下来的，结果就只有两个孔能看到点东西，而且还不清晰，另外我发现自己做的胶没别人做的好看，白的白，黑的黑，还有脏东西，我之前已经把锥形瓶什么的都洗干净了，可还是这样，为什么呢 高手能不能给我点建议，谢谢啦   |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-05-12 15:44:59
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西瓜
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1.在我看来，你这个是PCR没有扩增出产物。你标出来的两条带很小且模糊，很可能是引物二聚体。PCR扩增不出来的原因实在太多了，不好说。 2.Maker跑得很好，条带亮，没有拖尾（没有降解，电泳中没有污染DNA酶），泳道也端端正正，说明做胶（琼脂糖、EB、缓冲液等等）、上样操作、电泳、拍照都没有大问题。当然如果偏巧就是PCR产物那几个孔破了或者没上到样品，或者PCR产物降解什么的，我就没话说了…… 3.你说胶不好，我不认为，我觉得挺好的： （1）“白的白，黑的黑”：【1】你这个胶应该是配胶时就加了EB吧。电泳的时候，EB会从正极向负极移动（与DNA反向）。你看你的胶，下半部是黑的，上半部是白的，那是因为EB都移到上面去了，所以上半部背景会更亮。【2】你标出来的那两条带上面，有一条黑带，应该是溴酚蓝（电泳时看到的那条蓝色的线）。【3】maker最上那条带的位置，有一道黑线，这个我就不懂了。可能也是上样缓冲液的指示剂（类似溴酚蓝）。你跑电泳时看到这个位置有颜色吗？ （2）“脏东西”：【1】可能是加EB加晚了，此时琼脂糖快凝固了，EB分散不开。加EB后记得摇匀。【2】我更倾向这个原因：机器不干净。就是说你拍照的仪器，放胶的那个地方可能脏了。这个很常见的。我们一般是铺层保鲜膜，再把胶放上去拍照，觉得脏了就换一张保鲜膜。 （3）“锥形瓶洗干净”：我们跑胶，锥形瓶、梳子、模具这些几乎不洗的，没问题滴！ 你说同学的好，不如也贴上来比较比较吧。 啰嗦了一堆，观点就一个：电泳很好，PCR可能有问题。 |
7楼2011-05-12 16:28:58
西瓜
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8楼2011-05-12 16:35:49
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9楼2011-05-12 16:59:48
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前面如果步骤都做得没错的话，有可能向楼上说的，做的胶不干净，也有可能跟最后的拍相技术有关。我刚开始学这东西时，也总是感觉相片出来不如别人做的好看，你试着调调机器的对比度、亮度什么的。再一个就是，自己的实验操作技术，虽说都是和别人一样，一步步做下来的，但最后结果就是和别人不一样，这还是说明自己的技术不过关，没事，多练练就好，我刚开始时也和你现在一样，连跑个胶都跑不出图像来，后来慢慢练练就好了。实验这个东西就是这样，又是错都不知道自己错在哪，对也不知道自己对在哪，操作熟练了就好了。 |
10楼2011-05-12 18:37:57
