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passingby

铜虫 (小有名气)

[交流] 高手帮帮我 已有6人参与

我刚开始学习做分子生物学实验，好多方面还不很懂，这张图是我做的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物拍的照，我基本上都是按照操作步骤做下来的，结果就只有两个孔能看到点东西，而且还不清晰，另外我发现自己做的胶没别人做的好看，白的白，黑的黑，还有脏东西，我之前已经把锥形瓶什么的都洗干净了，可还是这样，为什么呢

高手能不能给我点建议，谢谢啦
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不能再走一步算一步了，我要计划好每一步该怎么走，起码要做到心中有数！
1楼 2011-05-12 15:37:13
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-05-13 09:13:42
你要P的目的片段是多大啊 Maker是多少bp的啊 感觉你的带不像是产物啊 有点像引物形成的dimer啊 亮度不一样可能是EB的原因~~你看看吧 我觉得你是没p出来 看看DNA模板和引物什么的 还有退火温度什么的 好好做做吧 肯定能成功的
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9楼2011-05-12 16:59:48
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
★
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你这些孔里点的都是什么样 什么都不知道也不好分析啊~瓶子刷干净了是不是TAE什么的不干净或者制胶的板不干净啊
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2楼2011-05-12 15:44:59
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
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西瓜(金币+2, EPI+1): Ok~ 2011-05-12 16:04:30
1: PCR这个东西其实说实话，做得多了也就很随意了，但是对于初学者来说还是要注意各个操作细节，没有做出来没关系，可以改变体系，改变温度，延伸时间继续做。

2：你的胶确实配的不太好，有可能是琼脂糖溶解的不彻底，核算染料没有完全混合到缓冲液中，还有缓冲液是不是新配置的呢？

出现问题了，就要考虑到各个环节是不是出现了什么问题，然后找到问题，一一解决，那么最终一张完美的PCR图就会呈现到你的面前！

加油！
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3楼2011-05-12 15:48:54
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passingby

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by passingby at 2011-05-12 15:37:13:
我刚开始学习做分子生物学实验，好多方面还不很懂，这张图是我做的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物拍的照，我基本上都是按照操作步骤做下来的，结果就只有两个孔能看到点东西，而且还不清晰，另外我发现自己做的胶没别 ...

这是我做的一个正交PCR优化，看看PCR结果有哪些差异的，点的就是PCR产物，结果好多根本没有带，除了Marker其它都不清晰，会不会是DNA提的不好的缘故呢，做了好几块胶差不多都是这样，上半部分发白，和EB有关吗？这胶做的让我很纠结
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不能再走一步算一步了，我要计划好每一步该怎么走，起码要做到心中有数！
4楼2011-05-12 16:11:47
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