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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2, EPI+1): Ok~ 2011-05-12 16:04:30
1: PCR这个东西其实说实话，做得多了也就很随意了，但是对于初学者来说还是要注意各个操作细节，没有做出来没关系，可以改变体系，改变温度，延伸时间继续做。

2：你的胶确实配的不太好，有可能是琼脂糖溶解的不彻底，核算染料没有完全混合到缓冲液中，还有缓冲液是不是新配置的呢？

出现问题了，就要考虑到各个环节是不是出现了什么问题，然后找到问题，一一解决，那么最终一张完美的PCR图就会呈现到你的面前！

加油！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-12 15:48:54
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 辛苦，一并奖励 2011-05-13 09:13:27
1.在我看来，你这个是PCR没有扩增出产物。你标出来的两条带很小且模糊，很可能是引物二聚体。PCR扩增不出来的原因实在太多了，不好说。
2.Maker跑得很好，条带亮，没有拖尾（没有降解，电泳中没有污染DNA酶），泳道也端端正正，说明做胶（琼脂糖、EB、缓冲液等等）、上样操作、电泳、拍照都没有大问题。当然如果偏巧就是PCR产物那几个孔破了或者没上到样品，或者PCR产物降解什么的，我就没话说了……
3.你说胶不好，我不认为，我觉得挺好的：
（1）“白的白，黑的黑”：【1】你这个胶应该是配胶时就加了EB吧。电泳的时候，EB会从正极向负极移动（与DNA反向）。你看你的胶，下半部是黑的，上半部是白的，那是因为EB都移到上面去了，所以上半部背景会更亮。【2】你标出来的那两条带上面，有一条黑带，应该是溴酚蓝（电泳时看到的那条蓝色的线）。【3】maker最上那条带的位置，有一道黑线，这个我就不懂了。可能也是上样缓冲液的指示剂（类似溴酚蓝）。你跑电泳时看到这个位置有颜色吗？
（2）“脏东西”：【1】可能是加EB加晚了，此时琼脂糖快凝固了，EB分散不开。加EB后记得摇匀。【2】我更倾向这个原因：机器不干净。就是说你拍照的仪器，放胶的那个地方可能脏了。这个很常见的。我们一般是铺层保鲜膜，再把胶放上去拍照，觉得脏了就换一张保鲜膜。
（3）“锥形瓶洗干净”：我们跑胶，锥形瓶、梳子、模具这些几乎不洗的，没问题滴！

你说同学的好，不如也贴上来比较比较吧。

啰嗦了一堆，观点就一个：电泳很好，PCR可能有问题。
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7楼2011-05-12 16:28:58
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