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passingby

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-12 16:28:58:
1.在我看来,你这个是PCR没有扩增出产物。你标出来的两条带很小且模糊,很可能是引物二聚体。PCR扩增不出来的原因实在太多了,不好说。
2.Maker跑得很好,条带亮,没有拖尾(没有降解,电泳中没有污染DNA酶),泳 ...

灰常感谢你的建议啊
还可能真是EB加晚了,我怕EB太毒不敢趁胶太热的时候加,就用水凉一下然后才加的
另外也可能DNA没提好,我给你看一张我先前用CTAB提的DNA跑的电泳图,有同学告诉我杂质太多,可是我已经用24:1抽提3遍了

不能再走一步算一步了,我要计划好每一步该怎么走,起码要做到心中有数!
11楼2011-05-12 21:18:32
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passingby

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bbwalkman at 2011-05-12 16:59:48:
你要P的目的片段是多大啊 Maker是多少bp的啊 感觉你的带不像是产物啊 有点像引物形成的dimer啊 亮度不一样可能是EB的原因~~你看看吧 我觉得你是没p出来 看看DNA模板和引物什么的 还有退火温度什么的 好好做做吧 肯 ...

目的片段50bp左右,Marker是100bp的
不能再走一步算一步了,我要计划好每一步该怎么走,起码要做到心中有数!
12楼2011-05-12 21:21:09
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passingby

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuliansheng at 2011-05-12 18:37:57:
前面如果步骤都做得没错的话,有可能向楼上说的,做的胶不干净,也有可能跟最后的拍相技术有关。我刚开始学这东西时,也总是感觉相片出来不如别人做的好看,你试着调调机器的对比度、亮度什么的。再一个就是, ...

谢谢你的建议
不能再走一步算一步了,我要计划好每一步该怎么走,起码要做到心中有数!
13楼2011-05-12 21:22:47
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bbwalkman

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
那你那两条带可能就不是产物了 跑的太远了~~~没事多试几次
14楼2011-05-12 21:55:45
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whiskyxy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
有引物二聚体,EB多了
15楼2011-05-12 22:33:04
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
可能是上样缓冲液的量,或者提取的NDA 的问题,不过我也刚做过琼脂糖凝胶电泳,最后跑的胶也不好,条带不清
天道酬勤
16楼2011-05-23 00:09:42
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