24小时热门版块排行榜    

查看: 1520  |  回复: 15
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

passingby

铜虫 (小有名气)

[交流] 高手帮帮我 已有6人参与

我刚开始学习做分子生物学实验,好多方面还不很懂,这张图是我做的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物拍的照,我基本上都是按照操作步骤做下来的,结果就只有两个孔能看到点东西,而且还不清晰,另外我发现自己做的胶没别人做的好看,白的白,黑的黑,还有脏东西,我之前已经把锥形瓶什么的都洗干净了,可还是这样,为什么呢

高手能不能给我点建议,谢谢啦


回复此楼
不能再走一步算一步了,我要计划好每一步该怎么走,起码要做到心中有数!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by passingby at 2011-05-12 16:11:47:
这是我做的一个正交PCR优化,看看PCR结果有哪些差异的,点的就是PCR产物,结果好多根本没有带,除了Marker其它都不清晰,会不会是DNA提的不好的缘故呢,做了好几块胶差不多都是这样,上半部分发白,和EB有关吗 ...

你先确认下提的DNA模板ok了没,再做PCR吧。

话说,把标题改为具体问题吧,这样关注的人才多。提问也要讲方法的哦。
8楼2011-05-12 16:35:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

bbwalkman

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你这些孔里点的都是什么样 什么都不知道也不好分析啊~瓶子刷干净了是不是TAE什么的不干净或者制胶的板不干净啊
2楼2011-05-12 15:44:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2, EPI+1): Ok~ 2011-05-12 16:04:30
1: PCR这个东西其实说实话,做得多了也就很随意了,但是对于初学者来说还是要注意各个操作细节,没有做出来没关系,可以改变体系,改变温度,延伸时间继续做。

2:你的胶确实配的不太好,有可能是琼脂糖溶解的不彻底,核算染料没有完全混合到缓冲液中,还有缓冲液是不是新配置的呢?

出现问题了,就要考虑到各个环节是不是出现了什么问题,然后找到问题,一一解决,那么最终一张完美的PCR图就会呈现到你的面前!

加油!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-12 15:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

passingby

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by passingby at 2011-05-12 15:37:13:
我刚开始学习做分子生物学实验,好多方面还不很懂,这张图是我做的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物拍的照,我基本上都是按照操作步骤做下来的,结果就只有两个孔能看到点东西,而且还不清晰,另外我发现自己做的胶没别 ...

这是我做的一个正交PCR优化,看看PCR结果有哪些差异的,点的就是PCR产物,结果好多根本没有带,除了Marker其它都不清晰,会不会是DNA提的不好的缘故呢,做了好几块胶差不多都是这样,上半部分发白,和EB有关吗?这胶做的让我很纠结
不能再走一步算一步了,我要计划好每一步该怎么走,起码要做到心中有数!
4楼2011-05-12 16:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见