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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白浓缩过程中发生沉淀
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liulanhua

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白浓缩过程中发生沉淀 已有1人参与

蛋白在用PEG6000包埋浓缩过程中透析袋没挤紧，蛋白溶液流出了，PEG溶液是否可能进入透析袋？而且蛋白发生沉淀了，但不是絮状的沉淀，是那种很细的跟面粉似的沉淀，想请教下浓缩过程中为什么发生沉淀？
我的这种沉淀发生变性了吗？
怎样鉴别蛋白是否变性？
多谢虫友们！
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努力会有收获！
1楼 2011-05-09 17:10:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+5, EPI+1): 直接、必须EPI 2011-05-09 19:04:55
rainwander(EPI+1): 再追加1个，呵呵 2011-05-09 19:05:14
1、前几天跟你在短信里说了，你的透析袋是8千的，PEG分子量约为6千，是肯定你能够进入透析袋里的，建议起码用PEG2万来浓缩，但是也不保证绝对不能进入，因为透析袋的孔径也不一定绝对均一，总有些差异的，遇到大一点的孔径就能进去了。
2、透析袋破了，就更不用说了，肯定有进去了的。不是说袋子里的东西是处于流出状态的，PEG就不能进去，不是绝对的。下次买透析袋用的夹子，用新处理的透析袋，就没那么容易破了。
3、浓缩过程中有东西沉淀很正常，因为可能是某种溶质超过溶解度了，可能是盐类，也可能是蛋白质，这跟沉淀的性状没关系，特别是我看你有一张帖子里，有人建议你在4度浓缩，低温下溶解度大多会下降，所以沉淀很正常。当然，也可能是蛋白质的沉淀，因为PEG被用来沉淀蛋白质，可能你样品中有的蛋白质很容易被PEG沉淀下来，而PEG又通过透析袋的大孔径进入到样品中。我曾经试过PEG沉淀蛋白质，但是我所要的蛋白质对PEG不感冒，不沉淀，甚至使用2万，35%的含量都不沉淀，但是有的文章用的PEG聚合度和浓度都很低就能沉淀了，说不定你遇到的就是这个情况。
4、至于蛋白质有没有变性，很不好说，即使是沉淀了也不一定就会变性的。至于怎么鉴别有没有变性，这也不好说，得看你的蛋白质怎么检验，我们都不知道你的蛋白质是哪种。


有空就去找找这几篇，就明白了。
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒
蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的部分纯化
聚乙二醇8000对棉铃虫微粒体蛋白沉淀作用的研究
影响聚乙二醇沉淀试验实验因素的探讨

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-9 at 18:56 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-05-09 18:51:06
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-09 18:51:06:
1、前几天跟你在短信里说了，你的透析袋是8千的，PEG分子量约为6千，是肯定你能够进入透析袋里的，建议起码用PEG2万来浓缩，但是也不保证绝对不能进入，因为透析袋的孔径也不一定绝对均一，总有些差异的，遇到大一 ...

谢谢！
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努力会有收获！
3楼2011-05-09 19:46:17
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