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蛋白浓缩过程中发生沉淀 已有1人参与
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蛋白在用PEG6000包埋浓缩过程中透析袋没挤紧，蛋白溶液流出了，PEG溶液是否可能进入透析袋？而且蛋白发生沉淀了，但不是絮状的沉淀，是那种很细的跟面粉似的沉淀，想请教下浓缩过程中为什么发生沉淀？ 我的这种沉淀发生变性了吗？ 怎样鉴别蛋白是否变性？ 多谢虫友们！ |
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冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+5, EPI+1): 直接、必须EPI 2011-05-09 19:04:55
rainwander(EPI+1): 再追加1个，呵呵 2011-05-09 19:05:14
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rainwander(EPI+1): 再追加1个，呵呵 2011-05-09 19:05:14
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1、前几天跟你在短信里说了，你的透析袋是8千的，PEG分子量约为6千，是肯定你能够进入透析袋里的，建议起码用PEG2万来浓缩，但是也不保证绝对不能进入，因为透析袋的孔径也不一定绝对均一，总有些差异的，遇到大一点的孔径就能进去了。 2、透析袋破了，就更不用说了，肯定有进去了的。不是说袋子里的东西是处于流出状态的，PEG就不能进去，不是绝对的。下次买透析袋用的夹子，用新处理的透析袋，就没那么容易破了。 3、浓缩过程中有东西沉淀很正常，因为可能是某种溶质超过溶解度了，可能是盐类，也可能是蛋白质，这跟沉淀的性状没关系，特别是我看你有一张帖子里，有人建议你在4度浓缩，低温下溶解度大多会下降，所以沉淀很正常。当然，也可能是蛋白质的沉淀，因为PEG被用来沉淀蛋白质，可能你样品中有的蛋白质很容易被PEG沉淀下来，而PEG又通过透析袋的大孔径进入到样品中。我曾经试过PEG沉淀蛋白质，但是我所要的蛋白质对PEG不感冒，不沉淀，甚至使用2万，35%的含量都不沉淀，但是有的文章用的PEG聚合度和浓度都很低就能沉淀了，说不定你遇到的就是这个情况。 4、至于蛋白质有没有变性，很不好说，即使是沉淀了也不一定就会变性的。至于怎么鉴别有没有变性，这也不好说，得看你的蛋白质怎么检验，我们都不知道你的蛋白质是哪种。 有空就去找找这几篇，就明白了。 PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒 蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的部分纯化 聚乙二醇8000对棉铃虫微粒体蛋白沉淀作用的研究 影响聚乙二醇沉淀试验实验因素的探讨 [ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-9 at 18:56 ] |
2楼2011-05-09 18:51:06
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