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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化过程的一个问题
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wolaiyefeng

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 转化过程的一个问题

请问下，双酶切位点一个是平末端，一个是粘性末端，酶连的效果怎么样啊？哪些因素对酶连的效率有影响？
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1楼 2011-05-07 21:29:50
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wolaiyefeng(金币+4): 谢谢了 2011-05-07 22:11:32
西瓜(金币+4): Good 2011-05-07 23:40:38
wanhscn(MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-10-13 12:34:58
引用回帖:
Originally posted by wolaiyefeng at 2011-05-07 21:29:50:
请问下，双酶切位点一个是平末端，一个是粘性末端，酶连的效果怎么样啊？哪些因素对酶连的效率有影响？

还是可以连上的，多加些酶就可以了。
对酶连效率的影响我的总结有:
1.连接的体系。目的片段与载体片段的连接比例1：3,3:1都是可以的。
2.连接酶的效率要好，我一般用宝生物的T4连接酶。
3.连接温度要控制好，一般室温4H就可以的。
4.转化的细节。
我想起来的就这些了。
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2楼2011-05-07 21:56:34
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380218013

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-05-07 21:56:34:
还是可以连上的，多加些酶就可以了。
对酶连效率的影响我的总结有:
1.连接的体系。目的片段与载体片段的连接比例1：3,3:1都是可以的。
2.连接酶的效率要好，我一般用宝生物的T4连接酶。
3.连接温度要控制好， ...

酶连要室温4个小时这么久吗？？


我还想问 酶连10微升体系就可以了吗？
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好好生活，努力赚钱
3楼2011-10-12 18:04:00
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ruth_3912834

铜虫 (小有名气)
我一般用20微的体系，酶连16度16h,效果很好
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4楼2011-10-12 21:29:04
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ytetyio09

新虫 (正式写手)
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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5楼2014-03-25 10:00:38
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