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cyq880205

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE求助~~HELP!

最近几次制胶都长时间不凝,望高手帮忙分析一下
分离胶12%
H20 3.3ml
30% 4ml
1.5M HCl-Tris (8.8)   2.5ml
10% SDS   0.1ml
10% AP  0.1ml
TEMED   10ul

浓缩胶5%
H2O 2.1ml
30% 0.5ml
1.0M HCl-Tris 0.38ml
10% SDS   30ul
10% AP  30ul
TEMED   3ul




分离胶加大TEMED的量到20uL也不凝,用水封了,时间还是较长,浓缩胶问题比较严重好几个小时都不凝,催化剂量也加大了,还是不凝,用水做实验也不凝,30%Acr-Bis也是新配的,AP也重新配了,大家帮帮忙啊,冬天同样的配方都能凝的

[ Last edited by cyq880205 on 2011-5-3 at 10:16 ]
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

APS最容易出问题,重新用EP管配置10%APS,放在耳边轻听,没有过期的APS会发出噼啪的响声,否则就是过期了。
8楼2011-05-03 17:54:24
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

cyq880205(金币+3): 2011-05-03 11:47:26
看天(EPI+1): 鼓励一下啊 2011-05-03 18:51:11
1.首先确定你的30%凝胶储液配置的是否正确,丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是否添加的正确  比例是否正确
2.你配胶的时候你们室内的温度是不是很低,PAGE胶偶联是一个吸热反应,如果温度 太低的话 也是会造成很难凝固的   建议温度在20-30度
3.加大AP 和 TEMED的用量  不过我看你的配方里面的用量已经可以了
与人玫瑰手有余香
2楼2011-05-03 10:41:22
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cyq880205

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-05-03 10:41:22:
1.首先确定你的30%凝胶储液配置的是否正确,丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是否添加的正确  比例是否正确
2.你配胶的时候你们室内的温度是不是很低,PAGE胶偶联是一个吸热反应,如果温度 太低的话 也是会造成很难凝固 ...

室温25℃左右,凝胶储存液是29g丙烯酰胺和1g甲叉丙烯酰胺混合定容到100mL的
3楼2011-05-03 11:05:49
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lj206141

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cyq880205(金币+2): 2011-05-03 11:47:20
检查一下过硫酸铵是否过期或者吸潮,有必要的话换一瓶重新做一下
4楼2011-05-03 11:06:52
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