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请求指教：相同引物相同条件下出现疑似非特异性扩增
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这是下午刚出的PCR图：  用的是2%的琼脂糖凝胶，DNA marker I，130 V的电压条件下跑了27 min，PCR的退火温度是48度。 所需要的目标链长度为515 bp，几个月前课题组有做过相同的引物相同的模板（都是提取的同一纯系菌种的DNA），得到了很好的效果。今天用相同的引物在与之前相同的条件下（退火温度48度）做过几遍，结果发现都是在700 bp左右出现亮带。提高退火温度后（48°C,50°C,55°C），依然是在700 bp左右出现亮带。 现有以下两个疑惑： 1. 700 bp附近出现的亮带是否可能是目标链?如果是，是什么因素影响了它偏离了marker的指示条带？（下午新换的电泳液（1×TAE）,胶也是新制的） 2. 如果700 bp附近不是目标链，为什么非特异性扩增会这么明显？ 请各位大侠不吝赐教，小虫在这先感谢各位了。 |
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