| 查看: 552 | 回复: 2 | |||
[求助]
请求指教：相同引物相同条件下出现疑似非特异性扩增
|
这是下午刚出的PCR图：  用的是2%的琼脂糖凝胶，DNA marker I，130 V的电压条件下跑了27 min，PCR的退火温度是48度。 所需要的目标链长度为515 bp，几个月前课题组有做过相同的引物相同的模板（都是提取的同一纯系菌种的DNA），得到了很好的效果。今天用相同的引物在与之前相同的条件下（退火温度48度）做过几遍，结果发现都是在700 bp左右出现亮带。提高退火温度后（48°C,50°C,55°C），依然是在700 bp左右出现亮带。 现有以下两个疑惑： 1. 700 bp附近出现的亮带是否可能是目标链?如果是，是什么因素影响了它偏离了marker的指示条带？（下午新换的电泳液（1×TAE）,胶也是新制的） 2. 如果700 bp附近不是目标链，为什么非特异性扩增会这么明显？ 请各位大侠不吝赐教，小虫在这先感谢各位了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有102人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
糖类名称中的（+）（—）是啥意思啊？求高人指教！
已经有4人回复- 利用Primer 5设计引物问题
已经有6人回复
- 连接后转化子PCR出现非特异性的条带
已经有10人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- RT后扩增到的条带出现非特异性，该如何处理
已经有4人回复
- PCR非特异性扩增
已经有6人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】现要设计引物扩增后测序，无各个条件都满足的引物，请问什么条件是最重�
已经有5人回复
- 【求助/交流】ssr
已经有8人回复
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
2楼2011-05-01 09:26:15
hc1027
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1414.3
- 散金: 107
- 红花: 4
- 帖子: 903
- 在线: 311.3小时
- 虫号: 726621
- 注册: 2009-03-19
- 专业: 环境微生物学
3楼2011-05-01 17:52:55