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pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白

1,PICZaA在GS115内的分泌表达后,上清主要有什么蛋白?一般在多大KD的?
2,PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白的时候,跨膜蛋白的跨膜区需要处理掉吗?
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见得多爱的多
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-30 11:09:26:
酵母表达很烦吗?我从质粒构建到整合到表达到纯化,一共化了两个星期。
不是我让你试,是你的蛋白要想做出最优的表达,是不得不试,你看些综述就知道了。
做实验本来就是纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行的。

我从质粒构建到整合到表达到纯化,一共化了两个星期。


我真的很佩服你 对不起,碰上高手了

但是据我所知,载体构建后需要测序验证,然后转化后 酵母需要培养2-3天才能长出。然后你还要再次确定是否转化进去了(——也就是说是否是假阳性),然后诱导表达 需要至少鉴定四天的 再然后 做Western 至少一天才能出结果把?

两个星期 我实在佩服
见得多爱的多
6楼2011-04-30 18:32:09
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 高手高高手 2011-04-28 19:00:40
pidou213(金币+1): 还是应该感谢一下 2011-04-29 08:37:10
pidou213(金币+1): 讲的有道理 2011-05-10 12:31:38
pidou213(金币+1): 再加一个 2011-07-01 12:30:35
pidou213(金币+2): xx 2011-07-17 16:24:06
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉,因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区,表达时,酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做,估计得切跨膜区做一个,不切做一个。做个对照,因为最终酶活最能说明问题。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-04-28 17:54:51
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-28 17:54:51:
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉,因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区,表达时,酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做,估计得切跨膜区做一个,不切做一个。做个对照,因为最终酶活 ...

首先感谢你的回复,但是我想说的是,我之所以求助,就是因为我不确定,所以想找人来指导一下,结果你说了半天都是拿不定的答案,并且你也知道,做这个酵母表达很麻烦的,如果我自己有时间试一试的话,我还来求助做什么呢
见得多爱的多
3楼2011-04-29 08:36:24
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pidou213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-28 17:54:51:
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉,因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区,表达时,酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做,估计得切跨膜区做一个,不切做一个。做个对照,因为最终酶活 ...

1.这个应该需要通过跑PAGE来确定

这个问题,我的意思是想问问做过的人,拿张图或者根据自己的所知来回答,结果你说用PAGE胶来确定,你实在是太实在了,我相信做蛋白的就知道用PAGE来确定蛋白的吧?@
见得多爱的多
4楼2011-04-29 08:38:56
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