应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白
311/4返回列表1234下一页
查看: 2021  |  回复: 30
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白

1，PICZaA在GS115内的分泌表达后，上清主要有什么蛋白？一般在多大KD的？
2，PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白的时候，跨膜蛋白的跨膜区需要处理掉吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
见得多爱的多
1楼 2011-04-28 17:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 高手高高手 2011-04-28 19:00:40
pidou213(金币+1): 还是应该感谢一下 2011-04-29 08:37:10
pidou213(金币+1): 讲的有道理 2011-05-10 12:31:38
pidou213(金币+1): 再加一个 2011-07-01 12:30:35
pidou213(金币+2): xx 2011-07-17 16:24:06
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉，因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区，表达时，酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做，估计得切跨膜区做一个，不切做一个。做个对照，因为最终酶活最能说明问题。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-04-28 17:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-28 17:54:51:
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉，因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区，表达时，酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做，估计得切跨膜区做一个，不切做一个。做个对照，因为最终酶活 ...

首先感谢你的回复，但是我想说的是，我之所以求助，就是因为我不确定，所以想找人来指导一下，结果你说了半天都是拿不定的答案，并且你也知道，做这个酵母表达很麻烦的，如果我自己有时间试一试的话，我还来求助做什么呢
赞一下 回复此楼
见得多爱的多
3楼2011-04-29 08:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-28 17:54:51:
1.这个应该需要通过跑PAGE来确定。
2.最好除掉，因为分泌用的是PICZaA上的a factor。不切掉跨膜区，表达时，酵母不一定能够正确的去剪切。
如果我做，估计得切跨膜区做一个，不切做一个。做个对照，因为最终酶活 ...

1.这个应该需要通过跑PAGE来确定

这个问题，我的意思是想问问做过的人，拿张图或者根据自己的所知来回答，结果你说用PAGE胶来确定，你实在是太实在了，我相信做蛋白的就知道用PAGE来确定蛋白的吧？@
赞一下 回复此楼
见得多爱的多
4楼2011-04-29 08:38:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 鼓励 2011-05-03 21:09:41
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-04-29 08:36:24:
首先感谢你的回复，但是我想说的是，我之所以求助，就是因为我不确定，所以想找人来指导一下，结果你说了半天都是拿不定的答案，并且你也知道，做这个酵母表达很麻烦的，如果我自己有时间试一试的话，我还来求 ...

酵母表达很烦吗？我从质粒构建到整合到表达到纯化，一共化了两个星期。
不是我让你试，是你的蛋白要想做出最优的表达，是不得不试，你看些综述就知道了。
做实验本来就是纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行的。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2011-04-30 11:09:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-30 11:09:26:
酵母表达很烦吗？我从质粒构建到整合到表达到纯化，一共化了两个星期。
不是我让你试，是你的蛋白要想做出最优的表达，是不得不试，你看些综述就知道了。
做实验本来就是纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行的。

我从质粒构建到整合到表达到纯化，一共化了两个星期。


我真的很佩服你 对不起，碰上高手了

但是据我所知，载体构建后需要测序验证，然后转化后 酵母需要培养2-3天才能长出。然后你还要再次确定是否转化进去了（——也就是说是否是假阳性），然后诱导表达 需要至少鉴定四天的 再然后 做Western 至少一天才能出结果把？

两个星期 我实在佩服
赞一下 回复此楼
见得多爱的多
6楼2011-04-30 18:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-05-03 21:09:57
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-04-30 18:32:09:
我从质粒构建到整合到表达到纯化，一共化了两个星期。


我真的很佩服你 对不起，碰上高手了

但是据我所知，载体构建后需要测序验证，然后转化后 酵母需要培养2-3天才能长出。然后你还要再次确定是否转化 ...

做的顺手的话，中间不出什么问题
e.coli大约也就只要一周时间左右呗，酵母费劲点，长的慢些，但也要不了太久。

当然中间不出问题，不需要优化…要是有问题了，那可能两年也做不出来
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-04-30 23:22:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-04-30 23:22:09:
做的顺手的话，中间不出什么问题
e.coli大约也就只要一周时间左右呗，酵母费劲点，长的慢些，但也要不了太久。

当然中间不出问题，不需要优化…要是有问题了，那可能两年也做不出来

好吧 总的来说 还是感谢你的答复 真希望在现实中有这么一个诤友，或许实验就会快很多，进步会快很多，哈哈 你在哪个城市？
赞一下 回复此楼
见得多爱的多
8楼2011-05-01 09:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-05-01 09:12:40:
好吧 总的来说 还是感谢你的答复 真希望在现实中有这么一个诤友，或许实验就会快很多，进步会快很多，哈哈 你在哪个城市？

北京
回复此楼
9楼2011-05-02 21:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-05-02 21:06:42:
北京

不会是中国农业大学的吧？
赞一下 回复此楼
见得多爱的多
10楼2011-05-02 22:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pidou213 的主题更新
311/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +3 简单点0 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:15 by wangjihu
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +4 share_joy 2026-03-16 4/200 2026-03-17 21:32 by hmn_wj
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +8 曦熙兮 2026-03-15 8/400 2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭