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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取pBMC时抗凝剂的选择
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] 提取pBMC时抗凝剂的选择

需要提取外周血中的单核淋巴细胞，有很多抗凝剂，但是考虑到以后做反转录，求助各位那种抗凝剂比较好一点？能不能给出使用的浓度？有人说肝素是多糖对后续试验有影响，但是推荐选用EDTA，也有人说柠檬酸钠可以使用，请做过这方面试验的各位给出参考意见
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1楼 2011-04-25 12:07:47
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
友情帮顶
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2楼2011-04-25 22:43:32
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sunbio

禁言 (小有名气)
★
wkl1984(金币+1): 2011-04-26 12:16:52
西瓜(金币-1): 本版禁止广告 2011-04-26 19:38:02
西瓜:编辑内容 2011-04-26 19:38
本帖内容被屏蔽
3楼2011-04-26 10:57:45
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-25 22:43:32:
友情帮顶

谢谢，互相学习了
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4楼2011-04-26 12:17:51
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2011-04-25 12:07:47:
需要提取外周血中的单核淋巴细胞，有很多抗凝剂，但是考虑到以后做反转录，求助各位那种抗凝剂比较好一点？能不能给出使用的浓度？有人说肝素是多糖对后续试验有影响，但是推荐选用EDTA，也有人说柠檬酸钠可以使用 ...

补充一下，后续实验主要是做RT-PCR，EDTA会螯合镁离子，给PCR扩增带来不便，肝素是多糖物质，降低引物结合的特异性，另外有一点就是要计算细胞数目，按照细胞数目的多少加入Trizol试剂，有关抗凝剂的浓度说法不一，也没有参考标准，还请各位提供一下试剂操作时所用的浓度，毕竟是实验吗。
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5楼2011-04-26 17:30:18
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翟小翟

新虫 (初入文坛)
最后用什么方法啦？
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6楼2015-10-16 11:02:17
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mcdfish

新虫 (初入文坛)
我也很纠结，我又要提RNA，又要做凋亡。RNA不能用肝素钠，凋亡不能用EDTA，但是我一直用的是肝素钠的，因为后续还要培养几天，不知道有没有影响。求正解。
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7楼2015-11-21 19:51:54
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翟小翟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mcdfish at 2015-11-21 19:51:54
我也很纠结，我又要提RNA，又要做凋亡。RNA不能用肝素钠，凋亡不能用EDTA，但是我一直用的是肝素钠的，因为后续还要培养几天，不知道有没有影响。求正解。

最后怎么办了？？？怎么配置的抗凝剂？
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8楼2016-03-04 09:00:37
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