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wkl1984

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[求助] 提取pBMC时抗凝剂的选择

需要提取外周血中的单核淋巴细胞，有很多抗凝剂，但是考虑到以后做反转录，求助各位那种抗凝剂比较好一点？能不能给出使用的浓度？有人说肝素是多糖对后续试验有影响，但是推荐选用EDTA，也有人说柠檬酸钠可以使用，请做过这方面试验的各位给出参考意见

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1楼 2011-04-25 12:07:47

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西瓜

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2楼2011-04-25 22:43:32

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sunbio

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wkl1984(金币+1): 2011-04-26 12:16:52
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3楼2011-04-26 10:57:45

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Originally posted by 西瓜 at 2011-04-25 22:43:32:
友情帮顶

谢谢，互相学习了

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4楼2011-04-26 12:17:51

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wkl1984

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Originally posted by wkl1984 at 2011-04-25 12:07:47:
需要提取外周血中的单核淋巴细胞，有很多抗凝剂，但是考虑到以后做反转录，求助各位那种抗凝剂比较好一点？能不能给出使用的浓度？有人说肝素是多糖对后续试验有影响，但是推荐选用EDTA，也有人说柠檬酸钠可以使用 ...

补充一下，后续实验主要是做RT-PCR，EDTA会螯合镁离子，给PCR扩增带来不便，肝素是多糖物质，降低引物结合的特异性，另外有一点就是要计算细胞数目，按照细胞数目的多少加入Trizol试剂，有关抗凝剂的浓度说法不一，也没有参考标准，还请各位提供一下试剂操作时所用的浓度，毕竟是实验吗。