| 查看: 3713 | 回复: 13 | ||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
感受态的制备及转化？
|
||
|
这是我制备感受态及转化的流程，近期转化一直不成功，请大家给予指导。转化所用质粒是长期存于-40℃的，不知道影响大不？ （一）DH5a菌感受态的制备： 1、从LB平板上挑取DH5a单菌落,接种于3LB液体培养基中 37℃下振荡培养12h左右直至对数生长后期培养基中。 2、将菌悬液以1:100的比例接种于LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜，再将菌悬液以1:100的比例接种于100ml LB液体培养基中37℃，210rpm至OD ＝0.5左右(生长对数期），约2-3h 3、将菌液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清； 4、每只离心管中加入4ml冰冷的0.1M CaCl2，使菌体重悬，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清； 5、每只离心管中加入1ml冰冷的0.1M CaCl2，重悬后分装到无菌的1.5ml离心管中(每管100µl)； 6、置-40℃冰箱长期保存； （二）DH5a大肠杆菌的热击转化： ⑴ 分别在1管100µl感受态细胞中加入质粒1-2µl和无菌水1-2µl（阴性对照），轻轻旋转以混匀内溶物，冰浴30min； ⑵ 将离心管放至42℃的循环水浴中90s； ⑶ 快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却至室温； ⑷ 每管加800µl LB液体培养基，37℃培养箱中45min； ⑸ 取l转化的感受态细胞，分别转移到含相应抗生素的LB固体培养基上，用一无菌的弯头玻璃棒将菌液涂满整个平板表面； ⑹ 将平板置于超净台中直至平板表面菌液被吸收； ⑺ 封好平皿，倒置于37℃培养，12-16h。 [ Last edited by 1949stone on 2011-4-23 at 10:55 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有266人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 感受态细胞里到底有没有质粒？
已经有7人回复
- 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
已经有8人回复
- 急求酿酒酵母的电转感受态制备方法和转化方法
已经有13人回复
- 乳酸菌感受态细胞的制备
已经有6人回复
- 【求助】感受态细胞制备
已经有10人回复
- 【分享】农杆菌感受态制备和转化方法
已经有19人回复
- 【专题】------------------感受态、转化专题------------------
已经有24人回复
- 【求助/交流】请问本身有抗性的菌株制备感受态全程需要加抗性吗
已经有9人回复
yanying198
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 171.7
- 散金: 7
- 红花: 1
- 帖子: 136
- 在线: 84.3小时
- 虫号: 1038612
- 注册: 2010-06-09
- 专业: 生物大分子结构与功能
呵呵 我给忘记粘了，我也没配置过这两个buffer，所以没留意。 
9楼2011-04-22 18:34:43
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2011-04-22 10:43:15
elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 18
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 5850.5
- 红花: 7
- 帖子: 389
- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
3楼2011-04-22 13:12:01
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3059.1
- 散金: 942
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1408
- 在线: 255.2小时
- 虫号: 528502
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2011-04-22 13:43:12
20