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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

APEPI: 16
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
咸鱼(金币+5, EPI+1): 很认真呀，希望高手继续应助各位小木虫 2011-04-23 23:14:41

引用回帖:

Originally posted by 石头影子2002 at 2011-04-22 11:26:49:
不知道你有没方法？

这回给你简单点说吧
差速贴壁
原理超简单
就是利用不同细胞的贴壁速度不一样而达到将细胞分离纯化的目的
方法也不复杂的
1.将皿底铺上粘附液如多聚赖氨酸、明胶等等
2.一段时间后，等粘附剂充分在皿底形成一层粘附层
一般为37度一个小时以上
3.将消化完得混合细胞均匀接种到皿中
4.培养，期间大约一个小时左右成纤维细胞可以完成贴壁
如果明确知道你的目的细胞的贴壁时间的话就继续培养
要是不知道在摸索的话就选择在这个时候轻轻晃动培养皿吸走没有完成贴壁的细胞
5.将完成第一步出去成纤维细胞的混合细胞接着铺在第二个处理过的皿中，培养
再等待第二个阴性细胞完成贴壁，吸走未贴壁细胞
6.循环这个循环到纯化出来你想要的细胞
7.等阳性细胞完成贴壁后，吸走剩下的为贴壁细胞，完成了整个纯化过程
PS：要是知道你的细胞的贴壁速度的话
其实是可以两步到位的
1.培养混合细胞到阳性细胞正准备贴壁还未贴壁，但其他细胞完成贴壁的时间
2.吸走为贴壁细胞就是你想要的细胞，在做一下纯化就可以的了
PS：此种方法相对繁琐，但是对细胞无毒性作用，得到的细胞状态较好
但是纯度不是特别好，需进一步纯化

密度梯度离心
原理：用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离的方法。密度梯度离心常用的介质为氯化铯、蔗糖和多聚蔗糖。现在多用商品化的percoll了。
方法：
1.制作混合细胞
2.将细胞缓慢加入percoll中
3.离心
4.取各层细胞鉴定
5.确定阳性细胞的位置
6.直接收集阳性细胞所在层percoll
7.从percoll中收集细胞
PS：此种方法快速简便
得到的细胞相对纯度要更高一些
但是percoll有一定的细胞毒性
注意使用，尽量减少细胞在percoll中的时间