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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 梨果皮总蛋白的提取方法
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 梨果皮总蛋白的提取方法

最近要做ChIP，材料是红梨的果皮，提取总蛋白的方法是：
植物蛋白质的提取【普通法】
a、取1g转基因植物的叶片放到研钵中，加入900ul的蛋白质抽提液（10%甘油，100mM Tris-HCl，1mM PMST，5%PVP，10mM巯基乙醇）将叶片研成粉末；
b、在4℃、12000 rmp离心10 min，将上清转移到新的1.5ml EP管中，放置在冰上；
c、将抽提的蛋白质放置在-20℃保存备用。

但是，植物总蛋白的提取效果不太好，Western Blot检测不到目的蛋白。
请问各位虫友，有没有适合ChIP试验的梨果皮总蛋白提取的方法？
zxd95@126.com
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追梦的人
1楼 2011-04-20 17:02:03
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meaglexf

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-27 13:16:27
zxd95(金币+5): 谢谢，我尝试一下！ 2011-05-04 17:48:38
你可以用液氮研磨成粉，尽量细。然后加入你的提取液，混匀，80度水浴30分钟，再10000 rpm离心十分钟，收集上清。
这样会比你直接抽提效果要好得多。
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3楼2011-04-26 20:16:37
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 感谢应助 2011-04-20 23:12:54
zxd95(金币+5): 谢谢！ 2011-04-21 07:15:32
zxd95(金币+5): 谢谢！ 2011-04-25 15:59:53
可以使用上海生工生产的一步法植物活性蛋白质提取试剂盒（BSP004），说明书可以到他们网站上下载
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-20 22:56:50
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