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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] 线粒体DNA纯化前亮带单一,纯化后出现亮暗各一条带

各位大侠好,本人刚接触分子生物,今天实验过程中遇到一个问题,向各位大侠求助。
我现在做的是鱼类线粒体DNA全序列,在做克隆时,DNA纯化前亮单一且光亮,但是纯化后出现亮暗各一条带,长度相差1000bp左右(详见图片),不知道什么原因?(新手,等赚够金币了,再回馈社会


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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

silicare: 他做的是DNA,不是蛋白 2011-04-18 18:32:27
纯化后,原本在一起的蛋白分开了,所以两条带啊,不知道对不对,楼下继续。
2楼2011-04-18 17:30:03
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shaquila

金虫 (正式写手)

silicare: 他做的是DNA,不是蛋白 2011-04-18 18:32:32
marker多大呢?
蛋白跑不到这个位置吧
3楼2011-04-18 17:32:26
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genomelin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

克隆测序?那个是开环的载体吧?亮的是闭环的目的克隆?
4楼2011-04-18 18:55:07
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-18 17:32:26:
marker多大呢?
蛋白跑不到这个位置吧

做的是DNA,Marker为5000bp。
TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
5楼2011-04-19 08:46:29
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by genomelin at 2011-04-18 18:55:07:
克隆测序?那个是开环的载体吧?亮的是闭环的目的克隆?

对,克隆测序,这两张图片都是克隆前电泳结果,纯化后连接、转化、克隆。问题是纯化前带单一,纯化后怎么多出了一条带?
TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
6楼2011-04-19 08:49:40
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wazlf

银虫 (正式写手)

我也遇到你这样的问题,你还没说清楚呢!是检测模板,还是PCR 后检测?
失败不是成功之母,是贻误战机!
7楼2011-04-21 16:54:38
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shandongfmmu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大概明白你的意思,可能是纯化过程中使其形态变化,可能存在超螺旋,闭,开环等几种状态吧
快乐~~~~~~~
8楼2011-04-22 00:32:07
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-04-21 16:54:38:
我也遇到你这样的问题,你还没说清楚呢!是检测模板,还是PCR 后检测?

这两张照片分别是纯化前后的结果,按常规纯化前是一条带的话纯化后也应该是一条带,本人操作过程中十分小心,没有切到其他杂带。
TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
9楼2011-04-22 10:32:28
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科学米

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by shandongfmmu at 2011-04-22 00:32:07:
大概明白你的意思,可能是纯化过程中使其形态变化,可能存在超螺旋,闭,开环等几种状态吧

我想请教你一个问题,你是用什么方法纯化的?
10楼2011-04-22 16:35:58
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