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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] 线粒体DNA纯化前亮带单一,纯化后出现亮暗各一条带

各位大侠好,本人刚接触分子生物,今天实验过程中遇到一个问题,向各位大侠求助。
我现在做的是鱼类线粒体DNA全序列,在做克隆时,DNA纯化前亮单一且光亮,但是纯化后出现亮暗各一条带,长度相差1000bp左右(详见图片),不知道什么原因?(新手,等赚够金币了,再回馈社会


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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-18 17:32:26:
marker多大呢?
蛋白跑不到这个位置吧

做的是DNA,Marker为5000bp。
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5楼2011-04-19 08:46:29
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by genomelin at 2011-04-18 18:55:07:
克隆测序?那个是开环的载体吧?亮的是闭环的目的克隆?

对,克隆测序,这两张图片都是克隆前电泳结果,纯化后连接、转化、克隆。问题是纯化前带单一,纯化后怎么多出了一条带?
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6楼2011-04-19 08:49:40
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-04-21 16:54:38:
我也遇到你这样的问题,你还没说清楚呢!是检测模板,还是PCR 后检测?

这两张照片分别是纯化前后的结果,按常规纯化前是一条带的话纯化后也应该是一条带,本人操作过程中十分小心,没有切到其他杂带。
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9楼2011-04-22 10:32:28
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