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woaipan

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 60.7
帖子: 26
在线: 13小时
虫号: 894791

[交流] 【求助】急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！

我最近在纯化蛋白，估计纯化得到的蛋白分子量挺小的，低于10kD，想用tricine－sds-page电泳跑一下看看，但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液，我照着说明配好了，现在不知道如何使用，具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液，所以糊涂了。
注：文献中说是阳极电泳液加到底部，阴极的则加在上部。
亟待各位大虾的帮助和解决！

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电泳、bio-rad 电转化仪及操作

蛋白纯化

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1楼 2011-04-16 15:42:11

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静静秋

木虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 14 (小学生)
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帖子: 438
在线: 111小时
虫号: 1959137

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

19楼: Originally posted by protein780 at 2013-07-02 09:44:30
你好，是将胶直接泡在乙酸铵里吗？浓度多少？时间呢？我用文献查到的方法配制了tricine胶，并且按照要求的方法跑的，只是染胶的时候直接考染的，然后煮大概20分钟脱色，结果是10KD以下没有蛋白，好奇怪，菌液也是都 ...

我用的固定液是乙醇：醋酸：水=40:10:50，然后加入100mM的乙酸铵，放在固定液中摇动20-30min就可以了，然后再用水洗干净进行考染，染色的时候可以在50℃的水浴中，我一般是30min染色，20min脱色，然后用水把背景色透干净。