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woaipan

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助】急!有木有做过Tricine-SDS-PAGE小分子蛋白电泳的进!

我最近在纯化蛋白,估计纯化得到的蛋白分子量挺小的,低于10kD,想用tricine-sds-page电泳跑一下看看,但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液,我照着说明配好了,现在不知道如何使用,具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液,所以糊涂了。
注:文献中说是阳极电泳液加到底部,阴极的则加在上部。
亟待各位大虾的帮助和解决!
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静静秋

木虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by protein780 at 2013-07-02 09:44:30
你好,是将胶直接泡在乙酸铵里吗?浓度多少?时间呢?我用文献查到的方法配制了tricine胶,并且按照要求的方法跑的,只是染胶的时候直接考染的,然后煮大概20分钟脱色,结果是10KD以下没有蛋白,好奇怪,菌液也是都 ...

我用的固定液是乙醇:醋酸:水=40:10:50,然后加入100mM的乙酸铵,放在固定液中摇动20-30min就可以了,然后再用水洗干净进行考染,染色的时候可以在50℃的水浴中,我一般是30min染色,20min脱色,然后用水把背景色透干净。
24楼2013-07-04 23:37:42
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查看全部 33 个回答

woaipan

铜虫 (初入文坛)


,自己先顶一个,怎么木有人啊~,救命啊
2楼2011-04-16 15:49:16
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mamadexiao

木虫 (正式写手)


woaipan(金币+1): 2011-04-18 15:50:58
我觉得是不是那种中型胶板阿,上下各自装缓冲液的那种
另外,用TRICINE配的胶似乎也可以在一般的缓冲液里跑啊...
3楼2011-04-16 18:13:37
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woaipan

铜虫 (初入文坛)


貌似如果用一般的缓冲液电泳系统还是连续的,tricine好像就是不连续的电泳体系,所以好像必须得用阴阳极的缓冲液!
4楼2011-04-16 19:12:58
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