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woaipan

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 60.7
帖子: 26
在线: 13小时
虫号: 894791

[交流] 【求助】急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！

我最近在纯化蛋白，估计纯化得到的蛋白分子量挺小的，低于10kD，想用tricine－sds-page电泳跑一下看看，但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液，我照着说明配好了，现在不知道如何使用，具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液，所以糊涂了。
注：文献中说是阳极电泳液加到底部，阴极的则加在上部。
亟待各位大虾的帮助和解决！

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1楼2011-04-16 15:42:11

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静静秋

木虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 14 (小学生)
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虫号: 1959137

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2013-05-27 10:53:03

我最近在做Tricine胶，和普通胶的区别在于胶的配置方法不同，还有就是需要用阴阳两极缓冲液。可以先用低电压跑30min，然后再用正常电压跑完，注意控制温度，最好放在4℃的冷冻柜里面跑，效果会更好。
染色液和脱色液可以用普通胶的染色液和脱色液，染色和脱色时间不要过长了，染色之前一定要用固定液进行固定，以防小分子弥散了，染色液有很多中，我用的是乙酸铵，楼主可以试试，我跑出来了，条带很清晰