| 查看: 3911 | 回复: 13 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
chui2004铁杆木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？ 已有8人参与
|
|||
|
最近在做质粒构建的工作，当没有完成最终构建之前，质粒DNA转化大肠杆菌都很正常，而且很容易转化成功，但是将质粒构建成功后，转化大肠杆菌变得非常困难，而且DH5a转不进去;JM109，TOP10转入后，跑电泳比我的目的质粒小了，做双酶切检定，不是我要的质粒载体，这是怎么回事呢？ 我做的是一个重组酶的载体，原始载体是pBV220，将构建好的质粒转入BL21（DE3）感受态细胞中，在30°培养时，重组酶是否表达？原因是我在没诱导之前，质粒DNA已经发生了部分的重组。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有197人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何把质粒转入大肠杆菌中？
已经有13人回复
- 大肠杆菌转化问题
已经有5人回复
- 有木有大肠杆菌单拷贝的表达质粒？
已经有3人回复
- 质粒转化到大肠杆菌野生菌中验证遇到的非常非常怪的问题
已经有3人回复
- 大肠杆菌在摇瓶中休眠是怎么回事
已经有19人回复
- 质粒导入大肠杆菌
已经有9人回复
- 提取大肠杆菌质粒失败的原因
已经有11人回复
- 【求助/交流】求助大肠杆菌和红球菌穿梭质粒载体在哪能买到
已经有3人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌越摇越清，怎么回事
已经有19人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒
已经有11人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
chui2004
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 6147.9
- 红花: 2
- 帖子: 370
- 在线: 96.3小时
- 虫号: 325716
- 注册: 2007-03-17
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤生物治疗
4楼2011-04-13 08:23:50
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2011-04-12 22:21:19
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
3楼2011-04-12 22:26:23
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): 继续加油啊～ 2011-04-13 10:31:36
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): 继续加油啊～ 2011-04-13 10:31:36
|
1：你说你转正常的DH5a转不进去，转从公司买来的DH5a突变株就可以，这其实很正常，因为突变株有可能会导致你的质粒挂掉。。。 2：你转BL21时，虽说质粒比目的质粒小，很正常，因为质粒在细菌中的状态是不断变化的，唯一验证的方法就是酶切，既然你现在酶切验证没什么问题，说明你的重组载体是没有任何问题的，至于你说的重组酶是否已经表达有何证据？基因连接到载体上面就一定会表达吗？即便你这个载体也是表达的载体，不知道你要表达这个重组酶是否需要添加诱导剂呢？ |
5楼2011-04-13 10:14:08
20