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chui2004铁杆木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？ 已有8人参与
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最近在做质粒构建的工作，当没有完成最终构建之前，质粒DNA转化大肠杆菌都很正常，而且很容易转化成功，但是将质粒构建成功后，转化大肠杆菌变得非常困难，而且DH5a转不进去;JM109，TOP10转入后，跑电泳比我的目的质粒小了，做双酶切检定，不是我要的质粒载体，这是怎么回事呢？ 我做的是一个重组酶的载体，原始载体是pBV220，将构建好的质粒转入BL21（DE3）感受态细胞中，在30°培养时，重组酶是否表达？原因是我在没诱导之前，质粒DNA已经发生了部分的重组。 |
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chui2004
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): 继续加油啊～ 2011-04-13 10:31:36
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1：你说你转正常的DH5a转不进去，转从公司买来的DH5a突变株就可以，这其实很正常，因为突变株有可能会导致你的质粒挂掉。。。 2：你转BL21时，虽说质粒比目的质粒小，很正常，因为质粒在细菌中的状态是不断变化的，唯一验证的方法就是酶切，既然你现在酶切验证没什么问题，说明你的重组载体是没有任何问题的，至于你说的重组酶是否已经表达有何证据？基因连接到载体上面就一定会表达吗？即便你这个载体也是表达的载体，不知道你要表达这个重组酶是否需要添加诱导剂呢？ |
5楼2011-04-13 10:14:08
