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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】T载体转化DH5α，平板上没有斑
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】T载体转化DH5α，平板上没有斑

平板上只有零星的2、3 个 白斑，到底是为什么呢？转化时需要注意什么呢？涂板有什么注意事项吗
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1楼 2011-04-08 12:34:23
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 19:58:23
看天(EPI+1): 2011-04-09 01:50:20
T载体的连接效率还是很高的
按说不应该出现这个现象
分析一下原因：
1.确保连接没问题
2.DH5a的转化效率没问题，感受态放-80久了效率会降低的
3.这个和先在4度放里一阵可能是会有关系，毕竟转化后是没有经生长激活后在放于4度的。我们的都是转化后先让它长，要是赶上时间不合适就先把在37度培养上6小时以上在放在4度的
4.涂板的时候只要没把菌烫死的话，手法值影响单菌落的重叠，而不会影响菌落的生长的
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7楼2011-04-08 17:23:46
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
说明转化效率不高哦，先挑白斑看看是不是，你的转化体系是多少，涂了多少的菌液。T载体很好连的。
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2楼2011-04-08 13:23:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 19:58:14
看天(EPI+1): 2011-04-09 01:50:01
1: DH5α的感受态细胞效率不高。。。可以重新做感受态细胞或者购买
2：转化后你在摇床上摇的时间可以稍微长一些；
3：涂布的时候可以多涂布一些

其实楼主说的可以详细一些，这样方便大家给你解答！
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3楼2011-04-08 14:58:54
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-08 14:58:54:
1: DH5α的感受态细胞效率不高。。。可以重新做感受态细胞或者购买
2：转化后你在摇床上摇的时间可以稍微长一些；
3：涂布的时候可以多涂布一些

其实楼主说的可以详细一些，这样方便大家给你解答！

我是上午涂的板子，因为时间不好，就放在4度冰箱，晚上7点半放到37度恒温培养箱里，早上9点看着就没几个斑？是不是放在4度导致的呢？还有就是我涂板用力可能大了些
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4楼2011-04-08 16:56:06
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