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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助】T载体转化DH5α,平板上没有斑

平板上只有零星的2、3 个 白斑,到底是为什么呢?转化时需要注意什么呢?涂板有什么注意事项吗
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★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 19:58:23
看天(EPI+1): 2011-04-09 01:50:20
T载体的连接效率还是很高的
按说不应该出现这个现象
分析一下原因:
1.确保连接没问题
2.DH5a的转化效率没问题,感受态放-80久了效率会降低的
3.这个和先在4度放里一阵可能是会有关系,毕竟转化后是没有经生长激活后在放于4度的。我们的都是转化后先让它长,要是赶上时间不合适就先把在37度培养上6小时以上在放在4度的
4.涂板的时候只要没把菌烫死的话,手法值影响单菌落的重叠,而不会影响菌落的生长的
7楼2011-04-08 17:23:46
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)



xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
说明转化效率不高哦,先挑白斑看看是不是,你的转化体系是多少,涂了多少的菌液。T载体很好连的。
2楼2011-04-08 13:23:51
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★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 19:58:14
看天(EPI+1): 2011-04-09 01:50:01
1: DH5α的感受态细胞效率不高。。。可以重新做感受态细胞或者购买
2:转化后你在摇床上摇的时间可以稍微长一些;
3:涂布的时候可以多涂布一些

其实楼主说的可以详细一些,这样方便大家给你解答!
3楼2011-04-08 14:58:54
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-08 14:58:54:
1: DH5α的感受态细胞效率不高。。。可以重新做感受态细胞或者购买
2:转化后你在摇床上摇的时间可以稍微长一些;
3:涂布的时候可以多涂布一些

其实楼主说的可以详细一些,这样方便大家给你解答!

我是上午涂的板子,因为时间不好,就放在4度冰箱,晚上7点半放到37度恒温培养箱里,早上9点看着就没几个斑?是不是放在4度导致的呢?还有就是我涂板用力可能大了些
4楼2011-04-08 16:56:06
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