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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案

如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案
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1楼 2011-04-07 14:24:41
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蓝风叙

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
江苏虞游(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+3): 鼓励交流~~~ 2011-04-14 17:21:51
江苏虞游(金币+1): 2011-04-14 21:33:36
1 选用一些酸性环境的样品作为菌种筛选来源
2 选择性培养基也调pH至酸性....
3 测酸性蛋白酶活力进一步复筛
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6楼2011-04-14 14:54:18
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802311820

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
江苏虞游(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-07 15:25:22
江苏虞游(金币+1): 2011-04-09 17:49:33
先查找文献，看看有哪些菌种可以产酸性蛋白酶（好像曲霉属的菌种可以产，黑曲霉、米曲霉等），然后搜集相关菌种，或自己分离或到直接购买，然后筛选合适菌株，再进行培养条件优化，使之产量最大化。
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2楼2011-04-07 14:46:01
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江苏虞游

木虫 (正式写手)
我先在需要的是具体的筛选方案…………至于是何种菌株没限制要求
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3楼2011-04-08 12:01:35
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802311820

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
江苏虞游(金币+2): 2011-04-11 18:54:03
rainwander(金币+3): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-04-11 20:05:06
自然界中蕴藏着丰富的微生物资源，为了按照人类的需要利用微生物菌种资源，就需要有目的的进行微生物菌种筛选。一般来讲微生物菌种筛选对象有两种：一种是从自然界（包括土壤、水体等自然环境；还包括泡菜、堆肥等人为创造的环境）中进行菌种筛选，这与菌种分离纯化密不可分；另一种是从已经获得的微生物纯菌种中进行筛选，比如从菌种保藏机构保藏的菌种中进行筛选。两种微生物菌种筛选各有利弊，第一种筛选中是从复杂的微生物菌群中获得目的菌种，因此涉及菌种分离纯化及后期菌种鉴定等工作；但是由于是分离对象是复合菌群，因此筛选获得目的菌种的可能性也较大。第二种微生物菌种筛选由于是从多个微生物纯菌种中筛选，因此不必进行分离纯化，但是需要对目的菌种有所了解
，比如产甘露聚糖酶的菌种有细菌的芽孢杆菌及霉菌的曲霉等，这就需要确定想要获得的目的菌种是哪一类，进而对该类微生物菌种进行筛选。
   当然了，以上筛选只是获得初步的菌种，要想提高菌种性能，需要对菌种进行选育。微生物菌种筛选也应用于微生物菌种选育过程中。
   微生物菌种筛选首先需要确定筛选目的，也就是要获得什么样的菌种，是产某种酶的呢？还是产某种物质？还是具有特定适应性呢（如耐高温）？
   然后就是确定检测目的菌种的方法，也就是菌种筛选方法，比如筛选产蛋白酶的菌种可以用透明圈法等。
常用的菌种筛选方法有：
   透明圈法 在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景，有时需要特定染色液染色。具有对应功能的菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。比如在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。
   生长圈法 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物，那么，在这些菌的周围就会有工具菌生长，形成环绕菌落生长的生长圈。 该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌。工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株。
   抑制圈法 抑菌圈法与生长圈法正好相反。待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。例如：将培养后的单菌落连同周围的小块琼脂用穿孔器取出，以避免其它因素干扰，移入无培养基平皿，继续培养4-5天，使抑制物积累，此时的抑制物难以渗透到其它地方，再将其移入涂布有工具菌的平板，每个琼脂块中心间隔距离为2厘米，培养过夜后，即会出现抑菌圈。抑菌圈的大小反映了琼脂块中积累的抑制物的浓度高低。该法常用于抗生素产生菌的筛选，工具菌常是抗生素敏感菌。
   以上三种方法都是较为简便的菌种筛选方法。对于一些产特定物质菌种的筛选，有时需要借助液相或分光光度法检测了。而且这些方法检测室定量的，在菌种选育过程中也常用，有助于筛选高产菌株。

以上文字来源于网络，非原创，感觉说的挺好，特此搬来，希望对您有帮助。
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4楼2011-04-11 15:06:30
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